левый, правый и его аналоги
Газовый счетчик СГК-4 производства ВПО «Точмаш» (г.Владимир) можно встретить в тысячах частных домов на территории бывшего Союза и по сегодняшний день. Невысокая цена и неплохое качество используемых элементов сделали когда-то эту марку очень популярной.
Предлагаю вместе более подробно рассмотреть по инструкции по эксплуатации (паспорту) технические характеристики счетчиков газа СГК, устройство и принцип действия, отличия и межповерочный интервал, а также возможные его аналоги в случае замены.
Особенности и модельный ряд счетчиков газа СГК г. Владимир:
ВПО «Точмаш» выпускает три вида газовых расходомеров:
— СГК-1,6;
— СГК-2,5;
— СГК-4.
Аббревиатура СГК расшифровывается, как Счетчик Газовый Камерный. Цифра, «стоящая» после — указывает нам на номинальную пропускную способность расходомера в м3/час. Каждый из трех типов счетчика имеет свое предназначение.
СГК-4 Владимир
Счетчик с показателем 1,6 может устанавливаться в квартире или доме, где из газовых приборов присутствует только одна двух или четырех-конфорочная газовая плита.
Газовый счетчик СГК-2,5 предназначен для установки в жилом помещении, в котором из газового оборудования используется только газовый проточный водонагреватель — газовая колонка.
А вот счетчик СГК-4 может применяться уже для двух бытовых газовых приборов, например: газовая плита и напольный или настенный газовый котел небольшой мощности.
Характерной особенностью счетчика СГК является диаметр и тип резьбы на его штуцерах — М30х2. Этот параметр необходимо учитывать в том случае, если вдруг потребуется замена счетчика СГК (Владимир) на расходомер от другого производителя без затратных сварочных работ. Например, вместо него подойдет его аналог — счетчик СГК G4 «Сигнал-16» (г. Энгельс), но с такой же резьбой М30х2.
Также нужно учитывать расстояние между этими штуцерами (по осям) 110 мм и направление движения потока газа: слева-направо или справа-налево.
Межповерочный интервал эксплуатации данного прибора оставляет 8 лет, а срок его службы 16 лет.
Размеры счетчика газа СГК-4
Принцип работы и устройство счетчика СГК G4
Владимирский газовый счетчик состоит из трех основных элементов:
— корпуса из листовой стали покрашенного эмалью белого цвета;
— измерительного блока;
— роликового отсчетного устройства.
Принцип действия счетчика основан на поступательном движении мембран, установленных в двух камерах измерительного блока, и преобразовании его во вращательное движение при помощи специального кривошипно-шатунного механизма. Счетный механизм вращается только в одну сторону, благодаря специальному устройству, препятствующему его вращение в обратную сторону.
Дисплей счетчика СГК-4 Владимир
На дисплее счетчика газа СГК расположены восемь цифровых барабанчиков, а также прописан свой индивидуальный серийный номер расходомера и год его выпуска. Кроме этого, на передней панели обозначены параметры максимального и номинального расхода газа в м3/ час, максимальное давление 50 кПа, объем проходящего газа, и установлена защитная пломба.
На верхней части корпуса выдавлена стрелка, показывающая направление движения потока природного газа. Если стрелка направлена налево — счетчик СГК-4 правый, а если направо — то СГК-4 левый.
СГК Владимир: технические характеристики
Технические характеристики газовых счетчиков СГК
Преимущества счетчика гаа СГК-4:
— простота конструкции;
— компактность;
— невысокая цена.
Недостатки газовых счетчиков СГК-4 Владимир:
— нестандартная резьба, трудно подобрать замену;
— небольшой межповерочный срок эксплуатации;
— шумность при работе;
— расходомеры не всегда есть в наличии в магазинах.
Сегодня мы вместе разобрали бытовые газовые счетчики СГК-4 г.Владимир, их особенности, предназначение и виды: левый, правый. По инструкции о эксплуатации рассмотрели технические характеристики и принцип действия, устройство и подключение. Смотрим видео отзыв.
Читайте также:
Счетчик газа бытовой СГК-4 Владимир
В НАЛИЧИИ АНАЛОГ ПРОИЗВОДСТВА г. ЭНГЕЛЬС
Счетчик газа СГК G1,6; G2,5; G4 (г. Владимир) камерный бытовой (Левый, правый)
Изготовитель: ФГУП ВПО «Точмаш», г. Владимир.
Назначение: счетчики газа камерные бытовые СГК G1,6, СГК G2,5, СГК G4 предназначены для учета расхода неагрессивного неоднородного газообразного топлива на предприятиях ЖКХ, а также в квартирах и индивидуальных домах.
Гарантии изготовителя:
Гарантийный срок на счетчик газа СГК устанавливается 24 месяца со дня монтажа, но не более 36 месяцев со дня выпуска изделия.
При отсутствии в паспорте записи даты ввода в эксплуатацию время эксплуатации исчисляется с момента изготовления.
Корпус счетчика выполнен из листовой стали. Детали, контактирующие с газом, выполнены из газостойких материалов.
Технические характеристики счетчика газа СГК G1,6; G2,5; G4 (ФГУП ВПО «Точмаш», г. Владимир)
| Параметры | G1,6 | G2,5 | G4 |
| Номинальный расход | 1,6 | 2,5 | 4 |
| 2,5 | 4 | 6 | |
| Минимальный расход | 0,016 | 0,025 | 0,04 |
| Относительная погрешность при расходе | |||
От Q мин. |
+/- 3 | ||
| Свыше 0,1 Q ном. до Q макс. % не более | +/- 1,5 | ||
| Максимальное рабочее давление, кПа | 50 | ||
| Температура окружаещей среды | -20…+60 | ||
| 2,5 | |||
| Межповерочный интервал | 10 лет | ||
Межосевое растояние, мм.
|
110,5 | ||
| Габаритные размеры, см | |||
| Размеры резьбы штуцеров, дюйм | 1/2, 3/4 | ||
Газовый счётчик СГК 4 | РосЕврогаз
Производитель: ФГУП ВПО «Точмаш», г. Владимир.
У нас вы можете купить высокоточный газовый счётчик СГК 4 (диафрагменный). Монтажный комплект с резьбой ¾ или ½ дюйма входит в стоимость.
Наличие на складе в Москве. Цены и гарантия от производителя. Скидки для оптовых покупателей.
Счетчики газа СГК4 зарегистрированы в Государственном реестре средств измерений под №20726-05.
Технические характеристики
| Параметр | Значение | ||
| Номинальный расход | 4 | ||
| Максимальный расход | 6 | ||
| Минимальный расход | 0,04 | ||
| Относительная погрешность при расходе | |||
| От Q мин. до 0,1 Q ном.% не более | +/- 3 | ||
| Свыше 0,1 Q ном. до Q макс. % не более | +/- 1,5 | ||
| Максимальное рабочее давление, кПа | 50 | ||
| Температура окружаещей среды |
-20. ..+60 |
||
| Масса, кг | 2,5 | ||
| Межповерочный интервал | 10 лет | ||
| Межосевое растояние, мм. | 110,5 | ||
| Габаритные размеры, см | 224*194*172 | ||
| Размеры резьбы штуцеров, дюйм | 1/2, 3/4 | ||
Документация
Паспорт
Сертификат соответствия
Свидетельство об утверждении типа средств измерений
Счетчик газа бытовой СГК-4 ВПО «Точмаш» г. Владимир (Счетчик газа бытовой СГК-4 Сигнал Левый-16(вертикальный))
Газовый счетчик СГК-G4 СИГНАЛ-16 г.
Энгельс (Левый) с резьбой М30*2 является аналогичным по всем техническим характеристикам и присоединительным патрубкам прибору учета газа СГК-4 производства «Точмаш» г. Владимир или как его еще называют Владимирскому счетчику. По потоку газа данная модель является левосторонней (подача слева-направо). Патрубки входа и выхода газа находятся сверху счетчика на расстоянии 110 мм если считать от их центров.Бытовой мембранный прибор учета СГК-4 предназначен для измерения количества природного газа по ГОСТ 5542-87 или паров сжиженного газа по ГОСТ 20448-90, а также других неагрессивных газов при индивидуальном или коммунально-бытовом потреблении. Главным преимуществом счетчика СГК-G4 является возможность применения в домах и квартирах, где помимо газовой плиты есть еще газовая колонка для получения горячей воды. Счетчик отвечает всем требованиям российского стандарта.
| |
|---|---|
| Производитель | Сигнал |
| Страна производитель | Россия |
| Состояние | Новое |
| Область применения счетчика | Бытовой |
| Вид газа | Природный, Сжиженный, Другие неагрессивные газы |
| Вид счетчика | Мембранный |
| Максимальный расход, Qmax | 6. 0 (куб. м/час) |
| Номинальный расход, Qn | 4.0 (куб. м/час) |
| Минимальный расход, Qmin | 0.04 (куб. м/час) |
| Порог чувствительности, не более | 0.008 (куб. м/час) |
| Погрешность | ±1,5% |
| Способ монтажа | Вертикальный |
| Тип присоединения | Резьбовое |
| Присоединительный размер | М30×2 мм |
| Вес | 2.2 (кг) |
| Гарантийный срок | 24 (мес) |
| Дополнительные характеристики | |
| Минимальная температура измеряемой среды | -40.0 (град.) |
| Максимальная температура измеряемой среды | 60.0 (град.) |
| Рабочее давление | 0.03 (бар) |
| Максимальное рабочее давление | 0.05 (бар) |
| Потеря давления | 0.013 (бар) |
| Межповерочный интервал | 10. 0 (лет) |
| Материал корпуса | Сталь |
| Цвет | Белый |
| Минимальная температура окружающей среды | -40.0 (град.) |
| Максимальная температура окружающей среды | 60.0 (град.) |
| Направление потока газа в счётчике | Левый (слева-направо) |
| Варианты подбора счетчика газа | Аналоги Владимир ТОЧМАШ (СГК) М30 х 2 |
| Габаритные размеры | |
| Высота | 236.0 (мм) |
| Длина | 167.0 (мм) |
| Ширина | 198.0 (мм) |
Счетчик газа Сигнал СГК G4 правый (аналог СГК-4 Воронеж)
Газовый счетчик СГК G4 относится к классическому, давно проверенному и отработанному типу диафрагменных. Они отличаются высокой надежностью и точностью, отсутствием необходимости постоянного обслуживания, высокой долговечностью. Кроме того, установка таких счетчиков даже в условиях стесненного пространства не составит труда, им не нужны прямолинейные подводы до и после счетчика.
Таким образом они идеально подходят для нужд домашнего хозяйства.
Типоразмер счетчика обозначенный как G4 (показывает, что номинальный расход газа у него 4 метра кубических в час, а весь рабочий диапазон измеряемого расхода от 0,04 м3/ч до 6 м3/ч) полностью подходит для бытовых нужд, рассчитан на квартиру или не слишком большой частный дом.
Диафрагменный (мембранный) счетчик газа СГК G4 оборудован двумя камерами. Газ, поступая в герметический корпус попадает вначале в одну камеру, затем в другую, которые работают попеременно вытесняя его из предыдущей, благодаря диафрагмам и клапанному механизму на основе золотников. В дальнейшем это движение передается на четный механизм, который суммирует эти движения и показывает данные расхода пользователю.
Погрешности измерения счетчика газа СГК G4 не превышают 3% при низком расходе газа, и 1,5% при номинальном, базовом расходе газа.
Существуют две разновидности счетчика, с правым и левым подключением к трубопроводу, для удобства монтажа.
Назначение
Счетчик предназначен для измерения объема газа (природный газ по ГОСТ 5542-2014 и сжиженный газ по ГОСТ 20488-90) и его коммерческого учета. Вид климатического исполнения счетчика УХЛ, категория размещения 2,1 по ГОСТ 15150-69. Счетчик предназначен для эксплуатации при температуре окружающей среды от минус 40 до плюс 60С.
Счетчик имеет типоразмер — G4, и несколько исполнений — левый и правый, резьба штуцеров: М30х2.
Счетчик газа Сигнал СГК G4 правый (аналог СГК-4 Воронеж) и другие товары в данной категории доступны в каталоге интернет-магазина инженерной сантехники Фабрика тепла по выгодным ценам. Ознакомьтесь с подробными характеристиками и описанием, а также отзывами о данном товаре, чтобы сделать правильный выбор и заказать товар онлайн.
Купите такие товары, как Счетчик газа Сигнал СГК G4 правый (аналог СГК-4 Воронеж), в интернет-магазине инженерной сантехники Фабрика тепла, предварительно уточнив их наличие или срок поставки. Вы можете получить товар в Нижнем Новгороде удобным для Вас способом, для этого ознакомьтесь с информацией о доставке и самовывозе.
Вы всегда можете сделать заказ и оплатить его онлайн на официальном сайте Фабрика тепла. Для жителей Нижегородской области у нас не только выгодные цены на такие товары, как Счетчик газа Сигнал СГК G4 правый (аналог СГК-4 Воронеж), но и быстрая доставка в такие города, как Кстово, Дзержинск, Арзамас, Бор, Городец, Саров, Выкса, Муром, Павлово, Богородск.
Счётчик газа СГК-4 (Владимир) слева-направо М*30
Купить счётчик газа СГК-4 (Владимир) слева-направо М*30 в Иваново
Хотите купить счётчик газа в Иваново? Магазин «Теплотехника» предлагает Вам купить счётчик газа СГК-4 (Владимир) слева-направо М*30 в Иваново по доступной цене. Газовый счетчик СГК-4 производства ВПО «Точмаш» (г.Владимир) можно встретить в тысячах частных домов на территории бывшего Союза и по сегодняшний день. Невысокая цена и неплохое качество используемых элементов сделали когда-то эту марку очень популярной. Всегда в наличии и на заказ счётчики газа в Иваново можно купить в магазине «Теплотехника»!
Принцип работы и устройство счетчика СГК G4
Владимирский газовый счетчик состоит из трех основных элементов:
- корпуса из листовой стали покрашенного эмалью белого цвета;
- измерительного блока;
- роликового отсчетного устройства.
Принцип действия счетчика основан на поступательном движении мембран, установленных в двух камерах измерительного блока, и преобразовании его во вращательное движение при помощи специального кривошипно-шатунного механизма. Счетный механизм вращается только в одну сторону, благодаря специальному устройству, препятствующему его вращение в обратную сторону.
Магазин «Теплотехника» находится по адресу: Нижегородская область, г. Бор, Стеклозаводское шоссе, 4. В нашем магазине, Вы сможете купить счетчики газа в широком ассортименте. Наши специалисты всегда готовы дать вам профессиональные комментарии по вопросам установки и оказать помощь в выборе, учитывая все ваши пожелания.
Чтобы купить счётчик газа СГК-4 (Владимир) слева-направо М*30 в Иваново, свяжитесь с нами по телефону или оставьте заявку в форме обратного звонка, наши сотрудники проконсультируют Вас по всем интересующим вопросам.
Телефон: +7(83159)7-40-75 +7(987)744-17-99Пожалуйста, скажите, что узнали номер на СКИДКОМ
Показать телефон4 шага к защите цветовой грамотности вашего бренда
Color — это сложная арена тонких нюансов и нестыковок; все осознают его важность, но задумываемся ли мы когда-нибудь о том, как мы можем поддерживать и контролировать согласованность цветов бренда, когда они попадают в цепочку поставок?
Как гласит клише, «красота в глазах смотрящего», а с упаковкой визуальное воздействие продукта — это разница между успехом и неудачей.
Исследования показывают, что для оценки и вынесения подсознательного визуального суждения требуется всего 90 секунд, и от 62% до 90% этого суждения основывается только на цвете.
Color усиливает и определяет бренд, и каждый цвет вызывает психологический отклик, что делает выбор цвета бренда критически важным. Компании тратят большие стратегические деньги на творческие усилия, чтобы создать идеальный цвет бренда, который будет иметь правильную коннотацию для их потребителей; Вот почему компании делают все возможное, чтобы получить юридическую защиту бренда.
Все мы, возможно, знаем, как появились стикеры Post-it Notes и что это нововведение защищено законом, но что не так хорошо известно, так это то, что Post-it color Canary Yellow также защищено товарным знаком, а 3M не не единственный, кто обратился за защитой в суд:
Кристиан Лабутен выиграл битву против Ива Сен-Лорана в использовании красной подошвы в сочетании с другой цветовой обувью, T-Mobile выиграла битву розового мадженты против AT&T, Барби зарегистрировала свой знаменитый розовый Барби… список можно продолжить.
Если разработка идеального цвета бренда настолько важна, что компании вкладывают часы и миллионы в защиту своих активов, что произойдет, когда этот цвет будет применяться в различных материалах, производственных процессах и регионах?
Обеспечение повторяемости и достижимости цвета вашего бренда во всех точках соприкосновения с потребителями часто может оказаться серьезным препятствием и вызвать несколько нежелательных головных болей — так кто же контролирует стоимость этого актива, когда он передается цепочке поставок?
У большинства брендов отсутствует точный и достижимый стандарт цвета; Чаще всего бренды полагаются на чип неопределенного цвета и доверяют своим поставщикам ответственность за достижение максимально близкого соответствия с этим чипом прямо на прессе.
Большинство чернил, используемых в печатной машине, являются полупрозрачными, что означает, что основной материал, на котором печатается цвет, может повлиять на окончательный цвет. Кроме того, все материалы по-разному отражают свет, поэтому одна неопределенная цветовая цель для всех подложек и процессов только настроит бренды на сбой.
Разве стратегический (и дорогостоящий) цвет бренда не слишком ценен, чтобы оставить его выживание и целостность в руках разрозненных лиц, работающих на сторонних поставщиков?
При использовании этой бизнес-модели несогласованность неизбежна и часто усугубляется в разных регионах из-за субъективной интерпретации цвета.
Риск реальный. Более 25% владельцев брендов указывают, что они часто сталкиваются с несоответствием или неточностью цвета, а также увеличиваются затраты на переделку, при этом владельцы брендов несут дополнительные расходы на запуск продукта в размере от 40 до 70%.
Так почему бы просто не упростить этот трудоемкий и субъективный элемент и не использовать науку и технологии, чтобы предоставить заранее согласованные, точные и достижимые данные о цвете для цепочки поставок, чтобы в конечном итоге защитить этот важнейший цвет бренда?
Это та область, где брендам действительно не хватает удачи.Следует поощрять бренды делать предварительные вложения в безопасность и целостность своих фирменных цветов, экономя на нежелательных « спасательных » расходах в дальнейшем за счет создания уникальных цветовых стандартов (сопровождаемых числовыми значениями), которые производятся для отражения формата и носителя, в которых они будут воспроизведены.
Вот четыре простых шага, которые помогут защитить цветовой баланс вашего бренда за счет достижения желаемой глобальной согласованности цветов:
- Разработайте и создайте стандарты цвета вашего бренда, используя фактический производственный процесс и основу, чтобы создать стандарт, который будет точным и достижимым при распространении по цепочке поставок.Устраняя субъективность, которая так часто встречается в прессе, бренды сократят время и затраты, а также увеличат скорость своего выхода на рынок. Помните, что последовательное воспроизведение вашего цвета в точках соприкосновения с потребителями — это наука, а не «черное искусство». Используйте этот метод, чтобы усилить единообразие бренда.
- Интегрируйте данные о цвете в цепочку поставок бренда как физически, так и в цифровом виде. Физический образец обеспечивает реальное и достижимое визуальное руководство, но сопутствующие показатели будут поддерживать постоянство цвета снова и снова.Интеграция цифровых данных в цепочку поставок поможет повысить точность проверки и общую согласованность цвета на протяжении всего процесса и всего портфеля продуктов.
- Ведение данных о цвете, интегрированных в цепочку поставок. Цвет со временем ухудшается, как и все остальное, и важно убедиться, что в цепочке поставок есть доступ к точному и актуальному стандарту цвета, чтобы снизить риск ослабления бренда из-за несоответствий цвета.
- Контролируйте качество цвета вашего бренда с помощью проверки цвета на соответствие заранее согласованной спецификации цвета, чтобы гарантировать, что цепочка поставок воспроизводит ваш цвет с заранее согласованными допусками — потому что теперь мы знаем, что это возможно!
Прелесть чисел в том, что это общий язык для всех регионов, и, применяя это решение для управления цветом к стратегии вашего бренда, у поставщиков не остается места для непоследовательного воспроизведения вашего цвета. Отличный партнер, обладающий опытом, инструментами и технологиями, поможет замкнуть цикл по любым требованиям к управлению цветом.
О Хоуп Мэсси
Хоуп закончила юридический факультет и является практикующим специалистом Prince2, имеет квалификацию Lean Six Sigma и специалист по изменениям.
Совсем недавно Хоуп помогала компаниям Bayer, J&J & SCJ повысить эффективность своих глобальных цепочек поставок графической продукции. Хоуп также работала над ключевыми проектами, включая крупную инициативу по изменению бизнеса, включающую аутсорсинг в Азии, улучшение процессов, финансовый анализ и моделирование, сокращение затрат и реструктуризацию бизнеса.
Sharkoon — СКАЛЛЕР SGK4
SKILLER SGK4 с настраиваемой RGB-подсветкой, специальным профилем и подсветкой клавиш, а также возможностью одновременного нажатия нескольких клавиш, сочетает в себе функциональный диапазон механических клавиатур с уникальным ощущением набора текста, присущим клавиатуре с резиновым куполом.И все это по непревзойденной цене. Кроме того, дерзкий дизайн с упором для рук особенно нацелен на геймеров, которым также предоставлены такие функции, как функциональные клавиши с предустановленными мультимедийными действиями и высокопроизводительное игровое программное обеспечение.
Любой номер, в любое время. Большинство доступных клавиатур с резиновым куполом оснащены опорой для одновременного нажатия двух клавиш и могут распознавать максимум два нажатия клавиш одновременно.SKILLER SGK4 является одной из немногих доступных клавиатур с резиновым куполом, с которой можно одновременно нажимать и регистрировать любое количество клавиш, благодаря поддержке одновременного нажатия клавиш n.
RGB-подсветка в шести зонах. Благодаря шестизонной подсветке SKILLER SGK4 может освещаться множеством эффектов в 16,8 миллионов цветов. Эффекты можно выбрать без использования загружаемого игрового программного обеспечения.Однако для полной настройки можно использовать программное обеспечение.
Гибкость со специальными клавишами.
Четыре клавиши профиля, расположенные в верхней части SKILLER SGK4, позволяют выбирать игровые профили с настраиваемыми назначениями клавиш или эффектами. Эффекты освещения также можно выбрать так же быстро, используя четыре клавиши подсветки.
Практические доп. Практичные дополнения, такие как клавиши с защитой от ореолов, игровой режим с деактивированной клавишей Windows и многочисленные функциональные клавиши с предустановленными мультимедийными действиями, гарантируют, что технологии не будут мешать игровому удовольствию.
Интуитивно понятное игровое программное обеспечение. Игровое программное обеспечение для SKILLER SGK4 можно скачать в любое время с нашего официального сайта. Программное обеспечение обеспечивает обширную настройку освещения и позволяет назначать клавиши, а также записывать и редактировать макросы.
Кроме того, с помощью программного обеспечения можно настроить поведение клавиши Windows, время отклика клавиши и частоту опроса.
| Функциональный ключ | Позиция (я) | Описание Действия | Графическое представление | Длина | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Этот подраздел раздела «Последовательность» сообщает о различиях между канонической последовательностью (отображаемой по умолчанию в записи) и различными отправленными последовательностями, объединенными в записи. | 62 | Q → E в CAR58097 (Ref.4) | 1 | |||||||||||
| Конфликт последовательностей i | 152 | K → R в CAR58096 (Ref.4) | 1 | |||||||||||
| Конфликт последовательностей i | 196 | E → G в CAR58095 (Ссылка 4) | 1 | |||||||||||
| I → V в BAh22848 (PubMed: 14702039). | 1 | |||||||||||||
| Конфликт последовательностей i | 371 | P → R в CAR58097 (Ссылка 4) | 1 | |||||||||||
| Конфликт последовательностей | E в CAA71138 (PubMed:08). | 1 | ||||||||||||
| Конфликт последовательностей i | 381 | D → E в CAA04146 (PubMed: 9722955). | 1 | |||||||||||
| Функциональный ключ | Позиция (я) | Описание Действия | Графическое изображение | Длина | ||||||||||
В этом подразделе раздела «Последовательность» описываются природные варианты белковой последовательности. Естественный вариант i VAR_041071 | 219 | V → I Ручное утверждение на основе эксперимента в i
| 1 | |||||||||||
| Естественный вариант i VAR_041072 | 342 | A → V Ручное утверждение на основе эксперимента в i
| 1 | |||||||||||
| Функциональный ключ | Позиция (я) | Описание Действия | Графический вид | Длина | ||||||||||
В этом подразделе раздела «Последовательность» описывается последовательность встречающейся в природе альтернативной изоформы (ов) белка. Изменения в аминокислотной последовательности могут быть следствием альтернативного сплайсинга, использования альтернативного промотора, альтернативного инициирования или сдвига рибосомной рамки. Альтернативная последовательность i VSP_037784 | 1–25 | MTVKT… VAILI → MVNKDMNGFPVKKCSAFQFF KKRVRRWIKSPMVS PSLKYTGSSMVHIPPGEPDF ESSLCQTCLGEHAFQRGVLP QENESCSWETQSGCEVREPC NHANILTKPDPRTFWTNDDP в изоформе 2. Информация, подобранная вручную, основанная на утверждениях в научных статьях, для которых нет экспериментальной поддержки. Ручное утверждение, основанное на мнении в i
| 25 | |||||||||||
| Альтернативная последовательность i VSP_037785 | 1 — 25 | MTVKT… VAILI → MGEMQGALARARLESLLRPR HKKRAEAQKRSESF. Ручное утверждение, основанное на мнении в i
| 25 | |||||||||||
| Альтернативная последовательность i VSP_037786 | 1 — 25 | MTVKT… VAILI → MKPSKRFFISPPSST в изоформе 4. Ручное утверждение на основе мнения в i Добавить BLAST | 25 | |||||||||||
| Альтернативная последовательность i VSP_037787 | 1 — 25 | MTVKT… VAILI → MSSQSSSLSE по мнению в i Добавить BLAST | 25 |
Эти различные материалы могут исходить из разных проектов секвенирования, разных типов экспериментов или разных биологических образцов. Конфликты последовательностей обычно имеют неизвестное происхождение.
, Бигнелл Г., Дэвис Х., Тиг Дж., Батлер А., Стивенс К., Эдкинс С., О’Мира С. , Vastrik I., Schmidt EE, Avis T., Barthorpe S., Bhamra G., Buck G., Choudhury B., Clements J., Cole J., Дикс Э., Форбс С., Грей К., Холлидей К., Харрисон Р., Хиллс К., Хинтон Дж., Дженкинсон А., Джонс Д., Мензис А., Мироненко Т., Перри Дж., Рейн К., Ричардсон Д., Шеперд Р., Смолл А., Тофтс К., Вариан Дж., Уэбб Т., Вест С., Видаа С., Йейтс А., Кэхилл Д. П., Луис Д. Н., Голдстроу П., Николсон AG, Brasseur F., Looijenga L., Weber BL, Chiew Y.-E., DeFazio A., Greaves MF, Green AR, Campbell P., Birney E., Easton DF, Chenevix-Trench G., Tan M. -H., Khoo SK, Teh BT, Yuen ST, Leung SY, Вустер Р., Футреал П.А., Страттон М.Р. 
uniprot.org/annotation/VAR_041072″>
, Futreal PA, Stratton MR 
, Танака Т., Исии С., Ямамото Дж., Сайто К., Кавай Ю., Исоно Ю., Накамура Ю., Нагахари К., Мураками K., Yasuda T., Iwayanagi T., Wagatsuma M., Shiratori A., Sudo H., Hosoiri T., Kaku Y., Kodaira H., Kondo H., Sugawara M., Takahashi M., Kanda K. , Ёкои Т., Фуруя Т., Киккава Э., Омура Ю., Абэ К., Камихара К., Кацута Н., Сато К., Таникава М., Ямадзаки М., Ниномия К., Исибаши Т., Ямасита Х., Муракава К., Фудзимори К., Танай Х., Кимата М., Ватанабэ М., Хираока С., Чиба Ю., Исида С., Оно Ю., Такигучи С., Ватанабэ С., Йосида М., Хотута Т., Кусано Дж., Канехори К., Такахаши-Фуджи А., Хара Х., Танасе Т.-О., Номура Ю., Тогия С., Комай Ф., Хара Р., Такеучи К., Арита М., Имосе Н., Мусасино К., Юки Х., Осима А., Сасаки Н., Аотсука С., Йошикава Ю., Мацунава Х., Итихара Т., Шиохата Н., Сано С., Мория С., Момияма Х., Сато Н., Таками С., Терашима Ю., Судзуки О., Накагава С., Сено А., Мидзогути Х., Гото Ю., Симидзу Ф., Вакебе Х., Хишигаки Х., Ватанабэ Т., Сугияма А., Такемото М., Каваками Б., Ямадзаки М.
, Ватанабе К., Кумагаи А., Итакура С., Фукузуми Ю., Фудзимори Ю., Комияма М., Таширо Х., Танигами А. , Fujiwara T., Ono T., Yamada K., Fujii Y., Ozaki K., Hirao M., Ohmori Y., Kawabata A., Hikiji T., Kobatake N., Inagaki H., Ikema Y., Okamoto С., Окитани Р., Каваками Т., Ногучи С., Ито Т., Сигета К., Сенба Т., Мацумура К., Накадзима Ю., Мидзуно Т., Моринага М., Сасаки М., Тогаши Т., Ояма М., Хата Х., Ватанабэ М., Комацу Т., Мидзусима-Сугано Дж. , Сато Т., Шираи Ю., Такахаши Ю., Накагава К., Окумура К., Нагасе Т., Номура Н., Кикучи Х., Масухо Ю., Ямасита Р., Накай К., Яда Т., Накамура Ю., Охара О., Исогай Т., Сугано С. 
, Оно Ю., Такигучи С., Ватанабэ С., Йосида М., Хотута Т., Кусано Дж., Канехори К., Такахаши-Фуджи А., Хара Х., Танасе Т.-О., Номура Ю., Тогия С., Комай Ф., Хара Р., Такеучи К., Арита М., Имосе Н., Мусасино К., Юки Х., Осима А., Сасаки Н., Аотсука С., Йошикава Ю., Мацунава Х., Итихара Т., Шиохата Н. ., Сано С., Мория С., Момияма Х., Сато Н., Таками С., Терашима Ю., Судзуки О., Накагава С., Сено А., Мидзогути Х., Гото Ю., Симидзу Ф., Вакебе Х., Хисигаки Х., Ватанабэ Т., Сугияма А., Такемото М., Каваками Б., Ямазаки М., Ватанабе К., Кумагаи А., Итакура С., Фукузуми Ю., Фудзимори Ю., Комияма М., Таширо Х., Танигами А., Фудзивара Т., Оно Т., Ямада К., Фуджи Y., Ozaki K., Hirao M., Ohmori Y., Kawabata A., Hikiji T., Kobatake N., Inagaki H., Ikema Y., Okamoto S., Okitani R., Kawakami T., Noguchi S. , Ито Т., Шигета К., Сенба Т., Мацумура К., Накадзима Ю., Мидзуно Т., Моринага М., Сасаки М., Тогаши Т., Ояма М., Хата Х., Ватанабэ М., Комацу Т., Мидзусима-Сугано Дж., Сато Т., Шираи Ю., Такахаши Ю.
, Накагава К., Окумура К., Нагасе Т., Номура Н., Кикучи Х., Масухо Ю., Ямасита Р., Накай К., Яда Т., Накамура Ю., Охара О., Исогай Т., Сугано С. SGK — Soccer Genome
Индивидуальные правила и процедуры обучения
Мы назначим 4 или 10 занятий в одно и то же время и в день подряд недель
Даты, которые вы не можете назначить, должны быть отправлены заранее, и мы планируем их приблизительно
4 пакета сессий должны быть завершены за 5 недель.
Пакет из 10 сеансов должен быть завершен за 12 недель.Сеансов макияжа нет. Если вы не можете провести сеанс, вы посетите групповое занятие.
Расписание Академии Soccer Genome
Пожалуйста, проверьте свою электронную почту перед отъездом на сессию. Если нам потребуется изменить / отменить сеанс, мы сообщим вам об этом по электронной почте.
Если вы опоздали более чем на 15 минут, тренер SG может покинуть поле, и с вас будет взиматься плата за сеанс.
SG может объединить отдельные занятия.Сообщите нам, если у вас возникнут проблемы, и мы сможем их избежать.
Хотя большинство ваших тренировок будет проходить с одним и тем же тренером, Soccer Genome оставляет за собой право сменить тренера, если это необходимо.
С родителями, у которых есть определенный временной интервал, свяжутся перед их последним сеансом в наборе, чтобы снова зарезервировать свой временной интервал.
Если вы не можете подтвердить еще четыре недели, мы не сможем задержать этот слот.При необходимости Soccer Genome имеет право запретить возможность повторного запуска сессий в течение того же временного интервала
Пакет из 10 сеансов должен быть завершен за 12 недель.
Если вы не можете подтвердить еще четыре недели, мы не сможем задержать этот слот.Информация о платеже
Вариант 1 : Онлайн-платеж с использованием следующих шагов оплаты .
Вариант 2 : Проверить платеж. Сделано для футбольного генома. Доставлен / отправлен по почте на 9101 Durant Rd
Индивидуальные сеансы
4 пакета сеансов: 280 долларов США (70 долларов США за сеанс)
Пакет из 10 сеансов: 700 долларов США (70 долларов США за сеанс)
Сеансы малых групп
4 пакета сессий: 140 долларов за игрока (35 долларов за сессию)
10 пакетов сессий: 350 долларов за игрока (35 долларов за сессию)
SG не формирует небольшие группы.
Родитель должен координировать свои действия с товарищами по команде, чтобы формировать небольшие группы.
Счет будет отправлен после того, как занятия будут запланированы! Зарегистрируйтесь ниже.
SGK предлагается только по воскресеньям
Киназа-1, индуцируемая сывороткой и глюкокортикоидами (SGK-1) играет роль в торговле мембранами при Caenorhabditis elegans
Abstract
Киназа SGK1, индуцируемая сывороткой и глюкокортикоидами млекопитающих, регулирует эндоцитоз ионных каналов.Здесь мы сообщаем, что в C . elegans sgk-1 Нулевые мутанты , GFP-tagged MIG-14 / Wntless, сортирующий рецептор Wnt, не смогли локализоваться на базолатеральной мембране кишечных клеток; вместо этого его неправильно отсортировали по лизосомам. Этот эффект можно частично объяснить изменением уровней сфинголипидов, поскольку снижение биосинтеза глюкозилцерамида восстанавливает локализацию MIG-14 :: GFP. Мембранный трафик в целом не был нарушен, так как не было обнаружено явных морфологических дефектов для ранних эндосом, аппарата Гольджи и эндоплазматического ретикулума (ER) у sgk-1 нулевых животных.
Рециркуляция MIG-14 / Wntless через Golgi может быть частично ответственна за наблюдаемый фенотип, потому что субклеточное распределение двух грузов плазматической мембраны, которые не рециркулируют через сеть trans-Golgi (TGN), затронуто в меньшей степени. Соответственно, нокдаун ArfGEF gbf-1 изменяет распределение SGK-1 на базолатеральной мембране кишечных клеток. Кроме того, мы обнаружили, что sgk-1 (RNAi) индуцировал ответ развернутого белка в ER, предполагая, по крайней мере, косвенную роль SGK-1 на ранней стадии секреторного пути.Мы предполагаем, что функция SGK-1 необходима для гомеостаза липидов и что он действует на разных этапах внутриклеточного переноса.
Образец цитирования: Zhu M, Wu G, Li Y-X, Stevens JK, Fan C-X, Spang A, et al. (2015) Киназа-1, индуцируемая сывороткой и глюкокортикоидами (SGK-1), играет роль в переносе мембран у Caenorhabditis elegans . PLoS ONE 10 (6):
e0130778.
https://doi.
org/10.1371/journal.pone.0130778
Редактор: Джули Г.Дональдсон, NHLBI, NIH, США
Поступила: 9 января 2015 г .; Одобрена: 22 мая 2015 г .; Опубликовано: 26 июня 2015 г.
Авторские права: © 2015 Zhu et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника
Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах документ и вспомогательные информационные файлы к нему.
Финансирование: Эта работа финансировалась Министерством науки и технологий Китая и муниципальным правительством Пекина. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.
Введение
Киназа 1, индуцируемая сывороткой и глюкокортикоидами млекопитающих (SGK1), представляет собой киназу AGC, которая была клонирована как ген, транскрипция которого стимулировалась сывороткой и глюкокортикоидами в опухолевых клетках молочной железы крыс [1-3].Хотя мыши с нокаутом SGK1 не обнаруживают серьезных дефектов [4-6], чрезмерная экспрессия SGK1 приводит к нескольким нарушениям, включая гипертензию, ожирение и рост опухолей [4, 5]. У млекопитающих SGK1 активируется инсулином и факторами роста через фосфоинозитид-3-киназу (PI3-киназу) и 3-фосфоинозитид (PIP3) -зависимую киназу (PDK1) [5, 7]. SGK1 может быть дополнительно активирован у млекопитающих мишенью рапамицинового комплекса 2 (mTORC2) [8]. Подобно другой киназе AGC Akt (также называемой PKB), SGK1 может фосфорилировать и ингибировать фактор транскрипции вилки FOXO3a (FKHRL1) [9]; но в отличие от Akt, SGK1 может активировать ядерный фактор-каппа B [10–12].
В ответ на множество стрессовых стимулов SGK1 активирует многие ионные каналы, переносчики и ферменты [13-15].
Как SGK1 регулирует эти ионные каналы и переносчики, в основном неизвестно. Недавно было высказано предположение, что SGK1 участвует в эндоцитозе мембранных белков [16]. Регулятор трансмембранной проводимости при муковисцидозе (CFTR) представляет собой хлоридный канал, расположенный на апикальной плазматической мембране (PM) эпителиальных клеток [17]. Любопытно, что хотя SGK1 ингибирует эндоцитоз CFTR в эпителиальных клетках дыхательных путей человека, он способствует эндоцитозу рецептора эпидермального фактора роста, который также является белком апикальной плазматической мембраны [16].Таким образом, SGK1 млекопитающих может участвовать в дифференциальной регуляции эндоцитоза белков плазматической мембраны.
Эндоцитоз — ключевой процесс, с помощью которого клетки усваивают молекулы [18]. Через рецептор-опосредованный эндоцитоз, основной путь в большинстве клеток, белки и липиды плазматической мембраны интернализуются в везикулах, покрытых клатрином, и доставляются в различные места назначения [19].
После эндоцитоза различные грузы сортируются в ранних эндосомах [20]: лиганды обычно входят в путь деградации, в то время как их мембранные рецепторы часто возвращаются обратно в плазматическую мембрану [21].Существует три различных пути, по которым мембранные рецепторы рециркулируют обратно в плазматическую мембрану: непосредственно от сортировки эндосом через трубчатые мембранные структуры (быстрая рециркуляция), от сортировочной эндосомы к рециркулирующим эндосомам или компартментам рециркуляции эндосом (ERC) (медленная рециркуляция) или посредством ретроградного транспорта в сеть trans-Golgi (TGN) с последующим реэкспортом в плазматическую мембрану [22-24].
В дрожжах Ypk1 — гомолог SGK-1 — активирует серин-пальмитоил-КоА-ацилтрансферазу (SPT) и способствует биосинтезу церамида и сфинголипида [25, 26].Церамид синтезируется в ER и транспортируется в Golgi для преобразования в сфингомиелин (SM) [27]. Керамид является важным структурным элементом клеточных мембран, а SM — одним из основных видов липидов в липидном бислое.
Нарушение биосинтеза церамида влияет на мембранный перенос [28].
В С . elegans , sgk-1 кодирует единственный ортолог SGK1 млекопитающих. По сравнению с диким типом (WT), мутанты с потерей функции ( lf ) из sgk-1 являются аномальными в отношении яйцекладки, развития, реакции на стресс и продолжительности жизни [29, 30], но лежащие в основе механизм в значительной степени неизвестен.Считалось, что SGK-1 регулирует C . elegans продолжительность жизни похожа на AKT-1 и AKT-2, подавляя C . elegans Фактор транскрипции FOXO DAF-16 [29]. Недавние генетические результаты показали, что SGK-1 активирует DAF-16 [30–32]. Однако остается неизвестным, может ли sgk-1 регулировать перенос через мембрану C . elegans .
Материалы и методы
C. elegans штамма Штамм C . elegans культивировали и поддерживали с использованием стандартных протоколов.
Были использованы следующие штаммы или аллели: N2 дикого типа, pwIs765 (P vha-6 MIG-14 :: GFP), qxIs194 (P tat-1 mCHERRY :: MANS ), zcIs4 ( hsp-4pr :: GFP ), qxIs162 (P ges-1 mCHERRY :: TRAM), qxEx2247 (P 0 6 vha : GFP), pwIs112 (P vha-6 hTAC :: GFP), pwIs846 (P vha-6 tagRFP :: RAB-5), qxIs111 (P ges111 -1 mCHERRY :: RAB-7) и pwIs72 (P vha-6 GFP :: RAB-5). sgk-1 (mg455) был любезно предоставлен Александром Сукасом (Гарвардская медицинская школа). SGK-1 (ok538) был получен от CGC. sgk-1 (ok538) и sgk-1 (mg455) были подвергнуты обратному скрещиванию с N2 6 и 4 раза, соответственно, и получили названия штаммов MQD1027 и MQD1029. BR3063 byEx (P sgk-1 SGK-1 :: GFP) был любезно предоставлен Ральфом Баумейстером (Университет Альберта-Людвига, Германия).
GFP был слит с C-концом SGK-1 с использованием 7.Геномная последовательность размером 3 т.п.н., содержащая изоформу и из sgk-1 (5,1 т.п.н.) и регуляторную последовательность в 2,2 т.п. Последовательность на дальнем 5 ’конце: CTCCGGTAACTTACTCATTTTCAAC, а последовательность на дальнем 3’ конце: CGTCGACACCAATCGCGTTTTGGTC. BR3063 был интегрирован гамма-облучением и переименован в hqIs150 (P sgk-1 SGK-1 :: GFP). hqIs150 был подвергнут обратному скрещиванию с N2 3 раза и получил название штамма MQD862.
Микроскопия и анализ изображений
Дифференциальный интерференционный контраст (ДИК) и флуоресцентные изображения были получены с помощью Zeiss AxioImager M1, оснащенного монохромной цифровой камерой AxioCam.Для обнаружения P hsp-4 GFP использовали объектив 10x air Plan-Neofluar. Для конфокальных изображений использовался инвертированный конфокальный микроскоп Zeiss LSM 510 Meta с лазерами 488 нм и 543 нм, а изображения обрабатывались и просматривались с помощью программного обеспечения LSM Image Browser и ZEN lite 2012 (Carl Zeiss).
Для SGK-1 :: GFP на РНКи gbf-1 животных помещали на подушечки из 2% агарозы в капле M9, содержащей 10 мМ левамизола, покрывали покровным стеклом с вазелиновым ободком и визуализировали конфокальной системой с вращающимся диском. Andor Revolution (Andor Technologies, Белфаст, Северная Ирландия), установленный на инвертированный микроскоп IX-81 (Olympus, Center Valley, PA), оборудованный камерой электронного умножителя с зарядовой связью iXon EM + (Andor Technologies).Образцы получали с помощью масляного объектива с числовой апертурой 63 × / 1,42. Каждый пиксель составляет 0,107 мкм. Возбуждение достигалось с помощью твердотельного лазера 488 нм. Время выдержки 100 мс.
Количественное определение совместной локализации mCHERRY :: RAB-7 и MIG-14 :: GFP, интенсивности флуоресценции MIG-14 :: GFP, hTAC :: GFP,
hsp-4pr :: GFP и SGK- 1 :: GFP с gbf-1 РНКиmCHERRY :: RAB-7 положительных кольцевидных пузырька, содержащих 0, 1 или ≥ 2 MIG-14 :: GFP puncta, было подсчитано для шести червей N2 и десяти мутантных червей sgk-1 (ok538) в пределах 3,036 мкм 2 области в кишечнике каждого червя.Цитоплазматический MIG-14 :: GFP был количественно определен путем определения средней интенсивности пикселей в неперекрывающихся 80 мкм областях 2 (8 мкм × 10 мкм) в кишечнике (4 области на червя, 8 глистов N2, 10 глистов N2). SGK-1 (MG455) и 13 червей SGK-1 (ok538) ). Значение P было рассчитано с использованием критерия суммы рангов Вилкоксона. Цитоплазматическое накопление hTAC :: GFP определяли количественно путем определения средней интенсивности пикселей в пределах 32 неперекрывающихся 80 мкм 2 областей (8 мкм × 10 мкм) в кишечнике (4 области на червя; 8 червей).Интенсивность hTAC :: GFP на базальной мембране и боковой мембране была измерена как среднее значение по 32 неперекрывающимся 35 мкм областям 2 (2,86 мкм × 12,27 мкм) в кишечнике (4 области на каждого червя; 8 гельминтов). ). Средняя интенсивность пикселей на единицу площади определялась с помощью программы Image J 1.46r, как описано ранее [33]. Значение P было рассчитано с использованием критерия суммы рангов Вилкоксона. Экспрессия GFP, управляемого промотором hsp-4 , была количественно определена с использованием изображения J 1.46р следующим образом. Каждое изображение, содержащее 15 червей, было получено с одинаковым временем экспозиции (1000 мс). Фон был удален путем удаления почти полностью черных пикселей (значения серого = 0, 1 или 2). Затем была измерена средняя интенсивность всего изображения. Для каждого состояния показаны результаты 10 независимых изображений (всего 150 червей). Изображения Z-stack SGK-1 :: GFP на gbf-1 RNAi были сжаты в ImageJ версии 1.48 (Wayne Rasband, National Institutes of Health, США) с использованием инструмента средней проекции, а общая интенсивность флуоресценции и площадь были измерены на кишечник, очерченный инструментом выделения многоугольника.
РНКи
РНКи выполняли, как описано [34]. Для экспериментов по кормлению РНКи полноразмерную кДНК sgk-1 клонировали в пустой вектор L4440, и полученную плазмиду pZM79 использовали для трансформации E . coli штамм HT115. Бактериальные штаммы РНКи cgt-1 , cgt-3 , gbf-1 и mon-2 были получены из библиотеки РНКи Ahringer. Бактериальные штаммы РНКи arl-1 , cgt-1 , cgt-3 и unc-11 были получены из библиотеки РНКи RCE1181.Планшеты NGM, содержащие 1 мМ IPTG, инокулировали бактериями RNAi и индуцировали в течение 12 часов при комнатной температуре. Яйца культивировали при 20 ° C до L4. Бактерии, трансформированные пустым вектором РНКи, служили контролем для кормления. РНКи начинались с 5–10 взрослых червей в течение 3–4 дней, и были визуализированы личинки L4 следующего поколения. Единственным исключением был эксперимент gbf-1 РНКи для SGK-1 :: GFP, в котором РНКи начинались с личинок L3 в течение 3 дней и были визуализированы взрослые черви.
Иммунопреципитационно-масс-спектрометрический анализ (IP-MS)
Хромосомно интегрированных трансгенных червей, экспрессирующих SGK-1 :: GFP, культивировали на чашках с высоким уровнем роста (HG).Лизаты получали из 2 мл упакованных несинхронизированных червей с использованием FastPrep-24 (MP Biomedicals) в буфере для лизиса (20 мМ Трис-HCl pH 8,0, 150 мМ NaCl, 0,1% NP40, 2 мМ ЭДТА, 1 × коктейль ингибиторов протеаз из Рош (полный, без ЭДТА)). Белки, связанные с гранулами GBP (GFP-связывающий белок) (ChromoTek), элюировали 60 мкл 0,1 М глицин-HCl, pH 2,6, и нейтрализовали 10 мкл 1 М трис-HCl, pH 8,0. Белки осаждали 4-кратными объемами холодного ацетона, а затем повторно растворяли в 8 М мочевине, 100 мМ трис-HCl, pH 8.5. После восстановления 5 мМ TCEP и последующего алкилирования 10 мМ йодацетамида образцы разбавляли в четыре раза до 2 М мочевины, 1 мМ CaCl 2 , 20 мМ метиламина, 100 мМ трис-HCl, pH 8,5, и расщепляли 1 мкг трипсина при 37 ° C в течение ночи. Анализ масс-спектрометрии проводили в двух экземплярах (два технических повтора). Для каждого технического повтора четверть полученных пептидов загружали под давлением в капиллярную колонку из плавленого кремнезема, заполненную 5 мкм материалом Luna C18 (RP, Phenomenex, Ventura, CA), с фриттой Kasil на конце.Колонку промывали буфером, содержащим 95% воды, 5% ацетонитрила и 0,1% муравьиной кислоты. После обессоливания 9 см внутренний диаметр 100 мкм. капилляр с вытянутым наконечником 5 мкм, заполненный 5 мкм материалом Luna C18, был присоединен к двухфазной колонке с помощью штуцера. Пептиды разделяли в течение 2-часового обратного фазового градиента, созданного с помощью четвертичной ВЭЖХ Agilent 1100 (Agilent), и распыляли непосредственно в масс-спектрометр LTQ Orbitrap (ThermoFisher Scientific) с приложением дистального напряжения распыления 2,5 кВ.Градиент был следующим: 5 минут от 100% буфера A (5% ацетонитрил, 0,1% муравьиной кислоты) до 5% буфера B (80% ацетонитрил, 0,1% муравьиной кислоты), затем увеличение до 30% буфера B в течение 75 минут, далее до 80% буфера B за 10 минут, до 100% буфера B за 10 минут и, наконец, 20-минутная промывка 100% буфером B. Скорость потока поддерживалась на уровне 0,1 мл / мин, и поток разделялся с помощью microTee, который был соединен в одном из своих отверстий с пустым внутренним диаметром 50 мкм. капиллярный. Длину пустого капилляра отрегулировали так, чтобы на конце колонки достигалась скорость потока около 200 нл / мин.Масс-спектрометр работал в режиме зависимости от данных. Обзорные MS-сканирования были получены на орбитальной ловушке с разрешением, установленным на значение 60000. Каждое обзорное сканирование (400-2000 m / z) сопровождалось 8 зависящими от данных сканированиями тандемной массы (MS / MS) в линейной ионной ловушке на 35% нормализованная энергия столкновения. Целевые значения AGC составляли 200 000 для обзора и 10 000 для сканирования MS / MS. Целевые ионы, уже выбранные для МС / МС, динамически исключались в течение 30 секунд. Белки идентифицировали путем поиска в спектрах МС / МС против C . elegans База данных белка с использованием Prolucid [35] и фильтрация результатов поиска с помощью DTASelect 2.0 [36] с коэффициентом ложного обнаружения 0,01 (FDR) на спектральном уровне, точностью массы предшественника 5 ppm и минимальным Z-баллом 4,0. Общий уровень ложных открытий для идентификации белков составляет менее 0,5%. Используя контрольные результаты IP-MS семнадцати трансгенных штаммов, экспрессирующих неродственные слитые белки GFP, идентифицированные белки ранжировали по баллам WD, рассчитанным, как описано ранее [37].Показатели WD помогают снизить уровень обычных загрязняющих белков и обогатить их специфическими связывающими белками [37]. RAW-данные экспериментов SGK-1 :: GFP IP-MS были депонированы в Консорциум ProteomeXchange [38] через репозиторий партнеров PRIDE с идентификатором набора данных PXD002190.
Анализ двугибридных дрожжей
Мы использовали систему Matchmaker (Clontech). КДНК гена sgk-1 клонировали в вектор-жертву, модифицированный из вектора pGAD GH (Clontech). КДНК arl-1 , unc-11 , cogc-3 и фрагменты mon-2 , gbf-1 клонировали в вектор-приманку, модифицированный из вектора pGBKT7 (Clontech).Плазмиды наживки и жертвы котрансформировали в штамм Ah209, и трансформанты отбирали на среде с двойным выпадением (SD / –Leu / –Trp). Активацию репортерного гена HIS3 оценивали на среде с тройным отсевом (SD / –Leu / –Trp / -His).
Количественная ОТ-ПЦР
Тотальную РНК экстрагировали из синхронизированных червей L4 с использованием TRIZOL (Invitrogen) с последующим удалением загрязняющей ДНК с помощью ДНКазы I. кДНК синтезировали из матриц тотальной РНК с использованием набора для обратной транскрипции (Takara).Праймеры, используемые для кПЦР из HSP-4 были праймеры # 1 [GTGGCAAACGCGTACTGTGATGA] / [CGCAACGTATGATGGAGTGATTCT], праймеры # 2 [TTCCGTGCTACATTGAAGCCGGTT] / [GCTTCGTCAGGGTTGATTCCACGA], праймеры # 3 [GGACTTGTTCCGTGCTACATTGAAG] / [GCTTCGTCAGGGTTGATTCCACGA] и PMP-3F [GAATGGAATTGTTTCACGGAATGC] / pmp-3R [CTCTTCGTGAAGTTCCATAACACGATG] для pmp-3 в качестве внутреннего стандарта. кПЦР выполняли в системе для быстрой ПЦР в реальном времени ABI 7500 с использованием набора для ПЦР в реальном времени Takara (SYBR Premix Ex TaqTM II).
Кормление мириоцином
Исходный раствор мириоцина (Sigma) с концентрацией 1 мг / мл готовили в метаноле.Взрослых беременных (по пять на чашку) переносили в планшеты, содержащие УФ-облученный (10 мин при 100 мДж / см 2 ) OP50, смешанный с равным объемом мириоцина или контрольного растворителя (метанол). Осаждение мириоцина происходило при 25,2 мкМ и 50,4 мкМ. Получены изображения первой партии личинок L4 следующего поколения.
Результаты
В
sgk-1 мутанты MIG-14 не смогли локализоваться на базолатеральной мембране кишечных клетокЧтобы определить, играет ли SGK-1 консервативную роль в эндоцитозе, мы исследовали функцию SGK-1 в рециклировании белка плазматической мембраны MIG-14. mig-14 кодирует C . elegans гомолог Wntless, эволюционно законсервированного многопроходного трансмембранного белка, который связывает Wnt в Golgi и сопровождает Wnt к плазматической мембране для его высвобождения. Белки Wnt представляют собой консервативное семейство секретируемых модифицированных липидами сигнальных гликопротеинов, которые играют критическую роль в эмбриональном развитии [39]. Связанный с плазматической мембраной MIG-14 извлекается посредством эндоцитоза и транспортируется к Гольджи ретромер-зависимым образом.У мутанта C . elegans лишены субъединиц ретромерного комплекса, MIG-14 неправильно сортируется на поздние эндосомы и лизосомы [40-42].
Распределение MIG-14 / Wntless явно изменилось у мутантов sgk-1 . У животных дикого типа MIG-14 :: GFP располагается на базолатеральной мембране (рис. 1A), а также на дисперсных точечных структурах в цитоплазме (рис. 1A ’). У двух предполагаемых нулевых мутантов sgk-1 , ok538 и mg455 локализация MIG-14 :: GFP в базолатеральной мембране была едва обнаружена, и большая часть точечных структур MIG-14 :: GFP локализовалась вблизи апикальной части. мембрана и средняя интенсивность флуоресценции цитоплазматического MIG-14 :: GFP немного снизились (Рис. 1B – 1D и S1 – S5 Рис.).Таким образом, субклеточная локализация MIG-14 зависит от SGK-1.
Рис. 1. Оба предполагаемых sgk-1 (нулевых) аллеля устраняют локализацию MIG-14 :: GFP на плазматической мембране в клетках кишечника.
Конфокальные изображения кишечника животных дикого типа (A, A ‘), sgk-1 (ok538) (B, B’) и sgk-1 (mg455) (C, C ‘), экспрессирующих MIG- 14 :: GFP. В клетках кишечника дикого типа MIG-14 :: GFP виден на базолатеральной мембране (стрелки, лучше всего просматриваются в фокальной плоскости около верха клетки), но не на апикальной мембране (наконечники стрелок, лучше всего просматриваются в фокальной плоскости в середина клетки).Масштабные линейки: 5 мкм. (D) Количественное определение средней интенсивности пикселей MIG-14 :: GFP, локализованных в цитоплазме. Средняя интенсивность обозначена красной линией. *** значение P <0,001, ** значение P <0,01 (критерий суммы рангов Вилкоксона).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g001
MIG-14 :: GFP был неправильно отсортирован по ранним лизосомам у мутантных червей
sgk-1Груз, который не может быть доставлен в TGN, остается в основном в эндосомах и, следовательно, должен транспортироваться в лизосомы [42].Чтобы проверить это представление, мы определили субклеточную локализацию MIG-14 :: GFP у мутантов sgk-1 . У животных дикого типа и поздние эндосомы, и ранние лизосомы маркируются mCHERRY :: RAB-7, но их можно различить морфологически: первые представляют собой точечные структуры, а вторые кольцеобразные пузырьки [33, 43]. Мы обнаружили, что меченные mCHERRY :: RAB-7 кольцеобразные везикулы не содержат или содержат только одну точку MIG-14 :: GFP у дикого типа (рис. 2, панели A, A ‘, A ”и C), в то время как большая часть они содержали две или более точки MIG-14 :: GFP в мутанте sgk-1 , что указывает на то, что MIG-14 :: GFP неправильно сортирован по лизосомам (Рис. 2, панели B, B ‘, B ”и C ).Сходный фенотип MIG-14 :: GFP был обнаружен у мутанта, лишенного rme-8 [42], который кодирует связанный с ретромером белок.
Рис. 2. MIG-14 :: GFP был доставлен в ранние лизосомы, маркированные RAB-7.
Конфокальные изображения клеток кишечника дикого типа (A, A ‘, A ”) и sgk-1 (null) (B, B’, B”), экспрессирующих MIG-14 :: GFP (A, B) или mCHERRY :: RAB-7 (A ‘, B’). На вставках показаны увеличенные области (× 2,5). Масштабные линейки: 5 мкм. Количественное определение RAB-7-положительных кольцевых пузырьков с MIG-14 :: GFP puncta внутри или без них (C).*** P значение <0,001, ** P значение <0,01 (тест Стьюдента t -тест).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g002
Гольджи-независимая рециркуляция мембранных рецепторов была дефектной у мутантов
sgk-1Учитывая, что до сих пор мы исследовали только груз, который рециркулирует через Гольджи, мы спросили, влияет ли рециркуляция в плазматическую мембрану у животных-мутантов sgk-1 .hTAC (а-цепь человеческого рецептора IL-2 TAC) и GLUT1 (переносчик глюкозы 1) представляют собой рецепторы плазматической мембраны, интернализируемые посредством клатрин-независимого эндоцитоза и возвращаемые обратно в плазматическую мембрану через компартмент рециркуляции эндоцитов (ERC) и RME- 1-положительные базолатеральные рециклирующие эндосомы [44, 45]. hTAC :: GFP в основном локализован на базолатеральной мембране у дикого типа (фиг. 3, панели A и A ’). У мутанта sgk-1 (ok538) пул hTAC :: GFP на базолатеральной мембране несколько уменьшился.Однако поразительно, что большие структуры hTAC :: GFP, возможно, агрегированные везикулы, накапливались в цитоплазме (Рис. 3, панели B, B ’и D). У мутанта sgk-1 (mg455) наблюдалось аналогичное цитоплазматическое накопление hTAC :: GFP, а также небольшое снижение hTAC :: GFP на базальной мембране (рис. 3, панели C, C ‘, D, E и F, а также S1, S2 и S6 – S8 (рис.). Для дальнейшего изучения того, являются ли внутренние скопления аномальными ранними эндосомами, мы определили распределение hTAC :: GFP и раннего эндосомного маркера RFP :: RAB-5 у червей дикого типа и sgk-1 (ok538) мутантных червей.У червей дикого типа только небольшая часть цитоплазматической точки hTAC :: GFP совместно локализована с ранними эндосомами, меченными RFP :: RAB-5 (S9 Fig). У мутантных червей sgk-1 (ok538) большая часть hTAC :: GFP помечены большими агрегированными структурами, которые также помечены RFP :: RAB-5 (S9 фиг.). Неясно, были ли эти структуры аномальными ранними эндосомами или белковыми агрегатами, которые содержат как hTAC :: GFP, так и RFP :: RAB-5.
Рис. 3. Дефектный мембранный транспорт hTAC :: GFP и GLUT1 :: GFP в мутантах sgk-1 (null) .
Конфокальные изображения клеток кишечника дикого типа (A, A ‘, G), sgk-1 (ok538) (B, B’, H) и sgk-1 (mg455) (C, C ‘), экспрессирующие hTAC :: GFP или GLUT1 :: GFP. Апикальная, базальная и боковая мембраны обозначены острыми стрелками, сплошными остриями стрелок и стрелками, соответственно. Масштабные линейки: 5 мкм. См. Легенду на рис. 2 для объяснения различных фокальных плоскостей. (D-F) Количественное определение средней интенсивности пикселей hTAC :: GFP, локализованного в цитоплазме (D), на базальной мембране (E) или боковой мембране (F).Средняя интенсивность обозначена красной линией. *** значение P <0,001, ** значение P <0,01 (критерий суммы рангов Вилкоксона).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g003
В клетках кишечника личинок L4 GLUT1 :: GFP ограничен апикальной мембраной и точечными структурами около апикальной мембраны (рис. 3G). Потеря sgk-1 не влияет на локализацию GLUT1 :: GFP в апикальной мембране, но увеличивает количество цитозольного GLUT1 :: GFP вблизи и вдали от апикальной мембраны (Рис. 3H).У молодых взрослых особей дикого типа GLUT1 :: GFP обнаруживается как на апикальной, так и на базолатеральной мембранах [43]. Мы обнаружили, что локализация GLUT1 :: GFP в базолатеральной мембране отсутствует у молодых взрослых мутантов sgk-1 (S10 фиг.). Причина изменения локализации в процессе разработки неясна.
Приведенные выше результаты предполагают, что sgk-1 играет роль во внутриклеточном движении рецепторов плазматической мембраны. Менее выраженный фенотип, наблюдаемый для GLUT1 :: GFP, может указывать на то, что апикальный рециклинг менее сильно зависит от SGK-1, чем базолатеральный рециклинг.
Восстановление глюкозилцерамида устраняет
sgk-1 (lf) индуцированные дефекты транспортаЧтобы выяснить, регулирует ли sgk-1 мембранный перенос через сфинголипиды, мы сначала протестировали мириоцин, ингибитор первого и ключевого этапа биосинтеза сфингозина. Мы скармливали червям дикого типа и sgk-1 (ok538) мириоцина 4,2 мкМ, 25,2 мкМ и 50,4 мкМ, но не обнаружили явного роста или морфологического эффекта ни в одном из штаммов.Кроме того, мы не наблюдали никакого эффекта мириоцина на паттерн локализации hTAC :: GFP или MIG-14 :: GFP у животных дикого типа (S11 и S12, фиг.). Вероятно, что лекарство не может эффективно накапливаться в клетках, чтобы показать эффект. Таким образом, мы отключили cgt-1 и cgt-3 , которые кодируют две из трех церамидглюкозилтрансфераз, которые важны для синтеза глюкозилцерамида и гликосфинголипидов. Аналогичен cgt-1; cgt-2; тройной мутант cgt-3 , cgt-1; cgt-3 двойные мутантные животные имеют пониженные уровни глюкозилцерамида и остановку на стадии личинки L1 [46].Примерно у 50% червей дикого типа cgt-1/3 двойных РНКи снижали экспрессию hTAC :: GFP до неопределяемого уровня. У оставшихся 50% червей дикого типа cgt-1/3 РНКи значительно снижали количество мелких цитоплазматических точек hTAC :: GFP (рис. 4). Пункта или агрегаты hTAC :: GFP большего размера наблюдались в цитоплазме кишечных клеток у мутанта sgk-1 , но их количество уменьшалось на cgt-1/3 РНКи (рис. 4). Следовательно, cgt-1/3 РНКи ослабляли фенотип sgk-1 нулевого по отношению к hTAC :: GFP.Аналогично, cgt-1/3 двойная РНКи подавляла sgk-1 в отношении MIG-14 :: GFP. sgk-1 null почти устраняет MIG-14 :: GFP на базолатеральной мембране, но это восстанавливается с помощью cgt-1/3 двойной РНКи (фиг. 5). Сообщалось, что черви, обработанные cgt-1/3, двойной РНКи арестовывались на стадии L1 [46], но в наших руках только некоторые из cgt-1/3 животных с двойной РНКи арестовывались на стадии L1, вероятно, из-за более слабого эффекта РНКи. Мутантные черви sgk-1 развиваются несколько медленнее, чем черви дикого типа.Интересно, что мутантные черви sgk-1 и , обработанные двойной РНКи cgt-1/3 , развивались очень медленно (рис. 6). В целом, наши результаты показывают, что sgk-1 и cgt-1/3 имеют сложные генетические взаимодействия. Наши данные показывают, что SGK-1 играет консервативную роль в гомеостазе липидов.
Рис. 4. Эффект cgt-1/3 двойной РНКи на паттерны локализации hTAC :: GFP.
Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа, обработанных контрольными РНКи (A, A ‘), cgt-1/3, двойной РНКи (B, B’) и sgk-1 (ok538) мутантных животных, обработанных контрольные РНКи (C, C ‘), cgt-1/3 двойные РНКи (D, D’), экспрессирующие hTAC :: GFP.Базолатеральные мембраны указаны стрелками. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g004
Рис. 5. Влияние двойной РНКи cgt-1/3 на паттерны локализации MIG-14 :: GFP.
Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа, обработанных контрольными РНКи (A, A ‘), cgt-1/3, двойной РНКи (B, B’) и sgk-1 (ok538) мутантных животных, обработанных контрольные РНКи (C, C ‘), cgt-1/3 двойные РНКи (D, D’), экспрессирующие MIG-14 :: GFP.Базолатеральные мембраны указаны стрелками. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g005
Рис. 6. Мутантные черви sgk-1 , обработанные cgt-1/3 двойной РНКи, развивались очень медленно.
Изображения дикого типа (A, B, C) и sgk-1 (ok538) мутантных животных (D, E, F), получавших контрольные РНКи (A, D) и cgt-1/3 двойных РНКи из библиотеки Ahringer (B, E) и библиотеки RCE1181 (C, F). Эксперименты начались с 5 взрослых беременных червей на каждой пластине, и пластинки были визуализированы через 5 дней.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g006
sgk-1 (lf) не влиял на морфологию ранних эндосом, Гольджи и ERДо сих пор мы предоставили доказательства того, что белки плазматической мембраны неправильно локализованы у мутантов sgk-1 . Одно из объяснений фенотипа состоит в том, что белки не достигают плазматической мембраны эффективно. Поэтому мы задали следующий вопрос, затрагивалась ли морфология органелл секреторного пути у мутантных животных sgk-1 .Во-первых, мы исследовали ранние эндосомы, проверив распределение GFP :: RAB-5 в фонах дикого типа и sgk-1 (ok538) (рис. 7, панели A и B). Не было обнаружено очевидных различий, что позволяет предположить, что функция SGK-1 не требуется для образования ранних эндосом. В более ранних экспериментах мы наблюдали большие агрегаты в мутанте sgk-1 (ok538) , которые были положительными по RFP :: RAB-5 и hTAC :: GFP (S9 Рис.), Но было неясно, были ли это агрегаты белка или аномальные ранние эндосомы.Учитывая, что sgk-1 (ok538) не влиял на GFP :: RAB-5, они, скорее всего, представляли собой белковые агрегаты, содержащие как hTAC :: GFP, так и RFP :: RAB-5. Альтернативно, потеря sgk-1 может повлиять на ранние эндосомы только на сенсибилизированном фоне, например, когда система оборота перегружена грузами. Сходным образом потеря sgk-1 не изменила морфологию компартмента Гольджи, помеченного mCHERRY :: MANS (маннозидаза), который проявлялся в виде дисперсных точечных структур в клетках кишечника (фиг. 7, панели C и D).Затем мы исследовали морфологию ER с использованием GFP-меченного TRAM (транслоцирующего мембранного белка, связывающего цепь), ER-специфического маркера, и не обнаружили очевидных различий между диким типом и мутантом sgk-1 (рис. 7, панели E и F). Однако потеря sgk-1 индуцировала ответ развернутого белка в ER (UPR-ER), на что указывает повышенная экспрессия hsp-4pr :: GFP (фиг. 8, панели A и B). Мы подтвердили индукцию UPR, обнаружив повышенные уровни мРНК hsp-4, у мутантных червей sgk-1 (ok538) L4 (рис. 8C).Вместе эти результаты указывают на то, что морфология ранних эндосом, Гольджи и ER существенно не изменена и что sgk-1 может быть важным для гомеостаза белков.
Рис. 7. Морфология ранних эндосом, подобная дикому типу, Гольджи и ER у мутанта sgk-1 (lf) .
Конфокальные изображения дикого типа (A, C, E) и sgk-1 (ok538) (B, D, F) клеток кишечника, экспрессирующих GFP :: RAB-5 (A, B), mCHERRY :: MANS (C, D) или GFP :: TRAM (E, F). Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g007
Рис. 8. Потеря активности sgk-1 вызвала UPR-ER.
(A) Флуоресцентные изображения червей, несущих трансген GFP под промотором hsp-4 и обработанных контрольными РНКи (пустой вектор pL4440) или sgk-1 РНКи. Масштабные линейки: 50 мкм. (B) Количественная оценка средней интенсивности пикселей изображений, показанных на (A), и 18 дополнительных изображений, девять для контрольной РНКи и девять для sgk-1 RNAi.Средняя интенсивность обозначена красной линией. На каждом изображении было пятнадцать червей L4 и десять изображений для каждого лечения. *** P значение <0,001 (тест Стьюдента t ). (C) Относительные уровни мРНК hsp-4 у животных дикого типа и sgk-1 (ok538) мутантных животных. ** P значение <0,01, * P значение <0,05 (t-критерий Стьюдента).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g008
SGK-1 :: GFP распределяется в коре плазматической мембраны и по цитоплазме клеток кишечника
Чтобы выяснить, где SGK-1 может физически взаимодействовать с системой мембранного транспорта, мы исследовали распределение SGK-1 :: GFP, управляемое его собственным промотором.SGK-1 :: GFP экспрессировался на высоком уровне в кишечнике, а также в нейронах головы и хвоста (S13 фиг.). В клетках кишечника SGK-1 :: GFP был замечен в коре плазматической мембраны (наиболее заметно апикальной мембране) (рис. 9A ‘и S13, рис.) И по всей цитоплазме в виде диффузного паттерна (рис. 9, панели B’ ‘). и C ‘, и S13B фиг.), иногда в точечных структурах на диффузном фоне (не показаны). Кортикальный пул SGK-1 :: GFP не колокализовался с RFP :: RAB-5 (фиг.9, панели A, A ’и A”).Распространенное появление SGK-1 :: GFP в цитоплазме препятствует заключению о совместной локализации SGK-1 :: GFP и mCHERRY :: MANS или mCHERRY :: TRAM, маркера ER (Рис. 9). Однако возможно, что SGK-1 может взаимодействовать с мембранными белками или мембранно-ассоциированными белками и временно рекрутируется в органеллы.
Рис. 9. SGK-1 :: GFP не работал совместно с RFP :: RAB-5, mCHERRY :: MANS или mCHERRY :: TRAM.
Конфокальные изображения кишечника трансгенных червей, экспрессирующих SGK-1 :: GFP вместе с RFP :: RAB-5 (A-A «), mCHERRY :: MANS (B-B») или mCHERRY :: TRAM (C-C «).На вставках показаны увеличенные области (× 2). Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g009
SGK-1 взаимодействует с белками, участвующими в регуляции внутриклеточного транспорта
Для выявления потенциальных связывающих SGK-1 белков на мембранах мы провели эксперименты по коиммунопреципитации. Используя GFP-связывающий белок (GBP), который представляет собой одноцепочечное антитело с высоким сродством к GFP [47], мы иммунопреципитировали (IP) слитый белок SGK-1 :: GFP, экспрессируемый в C . elegans под собственным промоутером. Коиммунопреципитированные белки идентифицировали с помощью масс-спектрометрии (МС). После вычитания фоновых связывающих белков и неспецифических взаимодействующих белков, которые коиммунопреципитировали только с GFP или с рядом неродственных слитых белков GFP [37], мы обнаружили пять белков, связанных с SGK-1, с установленной функцией во внутриклеточном транспорте: ARL-1, COGC-3, GBF-1, MON-2 и UNC-11 (таблица 1). Интересно, что гомологи всех, кроме UNC-11, локализованы в аппарате Гольджи [48-52].Например, человеческий гомолог ARL-1 локализован в Golgi и является членом малых GTPases семейства Arf / Sar, которые активируются факторами обмена гуаниновых нуклеотидов (ArfGEFs) [48, 49]. По сходству последовательностей GBF-1 и MON-2 классифицируются как ArfGEFs, и показано, что оба они располагаются на Golgi, хотя MON-2 лишен домена, ответственного за обмен гуаниновых нуклеотидов [50, 52]. Кроме того, COGC-3 является частью связующего комплекса на Гольджи [51].
MON-2 и COGC-3 также взаимодействовали с SGK-1 в дрожжевом двугибридном анализе, подтверждая эти два совпадения (S14 фиг.).Чтобы выяснить, регулирует ли SGK-1 перенос через мембрану посредством взаимодействия с нашими белками-кандидатами, мы оценили локализацию MIG-14 :: GFP и hTAC :: GFP после нокдауна отдельных кандидатов. Мы получили бактериальные штаммы РНКи arl-1 , gbf-1 , mon-2 и unc-11 . Мы обнаружили, что gbf-1 (RNAi) вызывал накопление hTAC :: GFP в цитоплазме (S15 фиг.), И около 60% червей, обработанных arl-1 RNAi, показали значительное снижение уровня экспрессии hTAC. :: GFP.Ни один из них не влиял на локализацию hTAC :: GFP в базолатеральной мембране (S15, фиг.). mon-2 (RNAi) конкретно устраняет латеральную мембранную локализацию MIG-14 :: GFP по окружности (S16 фиг.; Вертикальные линии). РНКи трех других генов не оказали очевидного влияния на MIG-14 :: GFP (S16 фиг.). Вместе эти результаты ни доказывают, ни опровергают возможность того, что sgk-1 регулирует мембранный трафик через этих четырех кандидатов.
Функция GBF-1 требуется для правильной локализации SGK-1
Среди пяти белков-кандидатов белок ArfGEF GBF-1 был охарактеризован во внутриклеточном перемещении в C . elegans [50]. Самый большой пул GBF-1 находится в cis-Golgi, и GBF-1 необходим для опосредованного эндосомами мембранного движения и нормальной морфологии Golgi и ER [50]. Таким образом, как и SGK-1, GBF-1 действует на разных этапах путей трафика. Поэтому мы проверили, будут ли GBF-1 и SGK-1 влиять друг на друга. sgk-1 (RNAi) не влиял на стационарную локализацию GBF-1 (данные не показаны). Напротив, gbf-1 (RNAi) влияет на локализацию SGK-1.SGK-1 :: GFP демонстрирует плавное непрерывное распределение по коре базолатеральной мембраны кишечных клеток. После gbf-1 РНКи SGK-1 :: GFP в коре базолатеральной мембраны изменились на мелкие точечные структуры (Рис. 10). Аналогичным образом, на апикальную локализацию SGK-1 :: GFP влияла РНКи gbf-1 , поскольку окрашивание сильно снижалось у животных, получавших РНКи (фиг. 10, панели B и B ’, заостренные стрелки). Между тем, на базолатеральной стороне кишечных клеток было больше ярких агрегатов SGK-1 :: GFP большого размера (фиг. 10C ’, пустые стрелки).Такие агрегаты наблюдались у контрольных животных лишь изредка (рис. 10С, пустые стрелки). На общую интенсивность флуоресценции SGK-1 :: GFP не влияет gbf-1 РНКи (S17 фиг.), Вероятно, потому, что увеличение агрегатов SGK-1 :: GFP компенсирует уменьшение связанного с плазматической мембраной SGK-1: : GFP. Учитывая, что GBF-1 коиммунопреципитируется с SGK-1 (таблица 1), этот результат предполагает, что GBF-1 может быть необходим для функции SGK-1 вблизи базолатеральной мембраны, либо участвуя в экзоцитозе связывающего SGK-1 белка. на плазматической мембране или через роль в гомеостазе липидов.В качестве альтернативы SGK-1 может напрямую потребовать функцию GBF-1 GEF.
Рис. 10. SGK-1 :: GFP, выстилающий базолатеральную мембрану кишечных клеток, был затронут gbf-1 РНКи.
Конфокальные изображения кишечных клеток червей, экспрессирующих SGK-1 :: GFP, обработанных контрольными РНКи (A, B, C) или gbf-1 RNAi (A ’, B’, C ’). Масштабная шкала соответствует 10 мкм. (D) Количественное определение базолатеральных мембран, меченных SGK-1 :: GFP. Некоторые черви имеют точечные базолатеральные мембраны в верхней плоскости и гладкие боковые мембраны в средней плоскости, и их называют «обеими».*** Значение P <0,001, нс: несущественно (критерий Стьюдента t ).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.g010
Discussion
В этом исследовании мы обнаружили, что SGK-1 связывает in vivo с пятью белками, функционирующими в мембранном переносе. В C . elegans , и COGC-3, и GBF-1 находятся на Golgi, и то же самое можно сказать об ARL-1 и MON-2 у других видов [48, 50, 52, 54].N-концевого участка Mon2p, который является консервативным от дрожжей до человека, достаточно для связывания с мембраной Гольджи, где Mon2p действует как каркасный белок [52]. Таким образом, мы предполагаем, что SGK-1 может рекрутироваться на мембрану Гольджи, чтобы регулировать перенос мембран, хотя не было обнаружено явной совместной локализации между SGK-1 :: GFP и маркером Гольджи mCHERRY :: MANS. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, рекрутируется ли SGK-1 на мембрану Гольджи при определенных условиях.
Белок ArfGEF GBF-1 локализован в непосредственной близости от Гольджи и сайтов выхода ER и необходим для нормальной морфологии ER [50].В этом исследовании мы обнаружили, что GBF-1 коиммунопреципитируется с SGK-1 (таблица 1), и потеря sgk-1 индуцировала ответ развернутого белка в ER (фиг.8). Следовательно, хотя SGK-1 :: GFP по большей части диффузно распределен в цитоплазме (S13 Рис.), Мы предполагаем, что SGK-1 может временно рекрутироваться на внутриклеточные мембраны с помощью GBF-1 и функционировать вместе с GBF-1 или через него. для регулирования перемещения грузовых белков в или из ER. Подтверждая эту идею, гладкое распределение SGK-1 :: GFP вдоль базолатеральной мембраны было нарушено с помощью gbf-1 RNAi (Fig 10).Возможно, SGK-1 может фосфорилировать GBF-1 и изменять его активность на периферии ER. Необходимы дополнительные исследования, чтобы охарактеризовать взаимодействие между SGK-1 и GBF-1 и проанализировать механизм, с помощью которого эти два белка регулируют перенос белков вокруг ER.
Трансцитоз позволяет обмениваться грузами между апикальной и базолатеральной мембранами и имеет решающее значение для установления и поддержания полярности клеток [55]. Хотя на SGK-1 нет очевидного сигнала нацеливания на мембрану, этот белок наблюдается вблизи или на плазматической мембране в клетках кишечника (S13, фиг.).Концентрация SGK-1 :: GFP выше в коре апикальной мембраны, чем в базолатеральной мембране. Любопытно, что делеция sgk-1 влияет на базолатеральную рециркуляцию более серьезно, чем апикальную рециклинг, это указывает на то, что активность SGK-1 более важна на базолатеральной мембране, чем на апикальной мембране, где SGK-1 больше в нормальных ситуациях. Кроме того, gbf-1 RNAi нарушают гладкий внешний вид SGK-1 :: GFP, выстилающего базолатеральную мембрану, но не выстилающего апикальную мембрану (Рис. 10).Было бы интересно определить, участвуют ли SGK-1 и GBF-1 в трансцитозе, чтобы координировать направленное движение грузов.
Ypk1 — дрожжевой гомолог SGK-1 — активирует серин-пальмитоил-КоА-ацилтрансферазу (SPT), которая катализирует первую и ключевую стадию синтеза церамида de novo [25, 26]. Недавно сообщалось, что Ypk1 активирует церамидсинтазу [26]. Мы подозреваем, что похож на дрожжи Ypk1, C . elegans SGK-1 может играть положительную роль в биосинтезе церамидов.В C . elegans , два типа сложных сфинголипидов, сфингомиелины и гликосфинголипиды, происходят из церамида, и оба содержат необычное сфингоноидное основание с разветвленной цепью, известное как d17iso [56]. Предполагается, что определенный вид сфинголипидов, называемый d17iso-GluCer или его производное, активирует комплекс TORC1, способствуя развитию личинок [57]. Инактивация ферментов пути биосинтеза d17iso-GluCer останавливает C . elegans на стадии L1 [57] или вызывает нехарактерный летальный фенотип [58].Наше наблюдение, что sgk-1 (null) усугубило фенотип развития cgt-1 / cgt-3 РНКи (рис. 6), согласуется с тем, что SGK-1 играет положительную роль в синтезе церамидов, поскольку этот фенотип можно объяснить за счет снижения d17iso-GluCer на cgt-1 / cgt-3 РНКи, что является умеренным для фона дикого типа, но значительно ухудшается из-за восстановления церамида, предшественника d17iso-GluCer, в sgk-1 нулевые животные. Кроме того, мы предполагаем, что cgt-1 / cgt-3 РНКи облегчили фенотип трафика sgk-1 (null) животных (рис. 4 и 5), направляя ограниченное количество церамида на синтезирующиеся сфингомиелины.У мутантов sgk-1 сфингомиелины могут быть восстановлены больше всего среди всех сложных сфинголипидов, что приводит к нарушению мембранного транспорта. Альтернативно, все сложные сфинголипиды могут быть снижены до аналогичных уровней, но фенотип трафика может быть более чувствительным к снижению сфингомиелинов, чем гликосфинголипидов. Следуя гипотезе о том, что SGK-1 регулирует перенос через мембрану, регулируя синтез церамидов, мы ожидали, что мириоцин, ингибитор SPT, изменит мембранную локализацию MIG-14 :: GFP и hTAC :: GFP, но этого не произошло (S11 и S12 Инжир).Возможно, Мириоцин не был доставлен достаточно эффективно, чтобы показать эффект из-за плотного барьера кутикулы червя. Остается проверить, инактивируют ли гены SPT sptl-1 , sptl-2 и sptl-3 в C . elegans , будет вызывать тот же фенотип трафика, наблюдаемый у мутантов sgk-1 .
Дополнительная информация
S1 Рис. Автофлуоресценция животных дикого типа и мутантных животных
sgk-1 (ok538) в красном, зеленом и синем каналах.Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа (A, A ‘, A ”, A”’) и sgk-1 (ok538) мутантных животных (B, B ‘, B ”, B”’) в красном цвете канал (A ‘B’), зеленый канал (A ”, B”) и синий канал (A ”’, B”’). Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s001
(EPS)
S2 Рис. Автофлуоресценция животных дикого типа и мутантных животных
sgk-1 (ok538) в красном, зеленом и синем каналах при различных условиях визуализации.Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа (от A до I) и sgk-1 (ok538) животных-мутантов (от A до I) в красном канале (от A до C, от A до C), зеленом канал (от D до F, от D до F) и синий канал (от G до I, от G до I) в «низком» состоянии (A, D, G, A ‘, D’, G ‘), «средний «Состояние (B, E, H, B ‘, E’, H ‘) и« высокое »состояние (C, F, I, C’, F ‘, I’).Низкий, средний и высокий обозначают три различных настройки размера точечного отверстия и усиления детектора. Высокое означает большее число, а низкое — меньшее. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s002
(EPS)
S3 Рис. Совместная локализация MIG-14 :: GFP и аутофлуоресценция у червей дикого типа.
Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа в зеленом канале, показывающие MIG-14 :: GFP (A, B) и синий канал (A ’, B’), указывающие на автофлуоресценцию.Базолатеральная и апикальная мембраны обозначены стрелками и острием стрелок соответственно. Автофлуоресцентные пятна отличались по форме и размеру от положительных структур MIG-14 :: GFP, и сигналы GFP на рис. 1 не совпадали с аутофлуоресценцией в синем канале. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s003
(EPS)
S4 Рис. Совместная локализация MIG-14 :: GFP и автофлуоресценция в нуль-мутанте
sgk-1 .Конфокальные изображения кишечных клеток sgk-1 (ok538) мутантных червей в зеленом канале, показывающие MIG-14 :: GFP (A, B) и синий канал (A ’, B’), указывающие на автофлуоресценцию.Автофлуоресцентные пятна отличались по форме и размеру от положительных структур MIG-14 :: GFP, и сигналы GFP на рис. 1 не совпадали с аутофлуоресценцией в синем канале. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s004
(EPS)
S5 Рис. Совместная локализация MIG-14 :: GFP и автофлуоресценция в нуль-мутанте
sgk-1 .Конфокальные изображения кишечных клеток sgk-1 (mg455) мутантных червей в зеленом канале, показывающие MIG-14 :: GFP (A, B) и синий канал (A ’, B’), указывающие на автофлуоресценцию.Автофлуоресцентные пятна отличались по форме и размеру от положительных структур MIG-14 :: GFP, и сигналы GFP на рис. 1 не совпадали с аутофлуоресценцией в синем канале. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s005
(EPS)
S6 Рис. Совместная локализация hTAC :: GFP и аутофлуоресценция у червей дикого типа.
Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа в зеленом канале, показывающие hTAC :: GFP (A, B) и синий канал (A ’, B’), указывающие на автофлуоресценцию.Автофлуоресцентные пятна отличались по форме и размеру от положительных структур hTAC :: GFP, и сигналы GFP на рис. 3 не совпадали с аутофлуоресценцией в синем канале. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s006
(EPS)
S7 Рис. Совместная локализация hTAC :: GFP и аутофлуоресценция у нулевого мутанта
sgk-1 .Конфокальные изображения кишечных клеток sgk-1 (ok538) мутантных червей в зеленом канале, показывающие hTAC :: GFP (A, B) и синий канал (A ’, B’), указывающие на автофлуоресценцию.Автофлуоресцентные пятна отличались по форме и размеру от положительных структур hTAC :: GFP, и сигналы GFP на рис. 3 не совпадали с аутофлуоресценцией в синем канале. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s007
(EPS)
S8 Рис. Совместная локализация hTAC :: GFP и аутофлуоресценция в нуль-мутанте
sgk-1 .Конфокальные изображения кишечных клеток sgk-1 (mg455) мутантных червей в зеленом канале, показывающие hTAC :: GFP (A, B) и синий канал (A ’, B’), указывающие на автофлуоресценцию.Автофлуоресцентные пятна отличались по форме и размеру от положительных структур hTAC :: GFP, и сигналы GFP на рис. 3 не совпадали с аутофлуоресценцией в синем канале. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s008
(EPS)
S9 Рис. Совместная локализация hTAC :: GFP и RFP :: RAB-5 в диком типе и нуль-мутантах
sgk-1 .Конфокальные изображения клеток кишечника дикого типа (A, A ‘, A ”) и sgk-1 (null) (B, B’, B”), экспрессирующих hTAC :: GFP (A, B) или RFP: : РАБ-5 (А ‘, Б’).На вставках показаны увеличенные области (× 2,5). Перекрывающиеся и неперекрывающиеся области обозначены стрелками и стрелками соответственно. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s009
(EPS)
S10 Рис. Характер экспрессии GLUT1 :: GFP у молодых взрослых червей.
Конфокальные изображения кишечных клеток молодых взрослых червей дикого типа (A) и sgk-1 (ok538) (B), экспрессирующих GLUT1 :: GFP. Базолатеральные мембраны указаны стрелками.Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s010
(EPS)
S11 Рис. Мириоцин не влияет на паттерны локализации hTAC :: GFP.
Конфокальные изображения кишечных клеток дикого типа, обработанных контролем (A, A ‘), 4,2 мкМ мириоцина (B, B’), 25,2 мкМ мириоцина (C, C ‘) и 50,4 мкМ мириоцина (D, D ‘), выражающий hTAC :: GFP. Базолатеральные мембраны указаны стрелками. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s011
(EPS)
S12 Рис. Мириоцин не влияет на паттерны локализации MIG-14 :: GFP.
Конфокальные изображения кишечных клеток дикого типа, обработанных контролем (A, A ‘), 4,2 мкМ мириоцина (B, B’), 25,2 мкМ мириоцина (C, C ‘) и 50,4 мкМ мириоцина (D, D). ‘), выражающий MIG-14 :: GFP. Базолатеральные мембраны указаны стрелками. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s012
(EPS)
S13 Фиг.Паттерн экспрессии SGK-1 :: GFP.
Экспрессия SGK-1 :: GFP наблюдается у эмбрионов, на всех личиночных стадиях и в течение всего взрослого возраста. SGK-1 :: GFP высоко экспрессируется в кишечнике и нейронах головы и хвоста, как описано ранее [28]. Апикальные и базолатеральные мембраны обозначены стрелками и стрелками. Масштабные линейки: 10 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s013
(EPS)
S14 Рис. Дрожжевой двугибридный анализ SGK-1 и возможных связывающих белков.
Клетки дрожжей котрансформировали плазмидой GAL4BD-приманки и плазмидой GAL4AD-жертвы, как указано. Среди двойных трансформантов (выращенных в отсутствие Leu и Trp или –LW) только два (AD-SGK-1 / BD-COGC-3 и AD-SGK-1 / BD-MON-2N) показали положительные взаимодействия, поскольку они росли в отсутствие Leu, Trp и His (–LWH). Очевидное положительное взаимодействие AD-SGK-1 / BD-UNC-11 было ложным, потому что BD-UNC-11 проявлял самоактивирующуюся активность независимо от жертвы (AD-SGK-1 или AD-Xrc4). Xrc4 — отрицательный контроль; это негомологичный коэффициент соединения концов из S . pombe [59] и не ожидается, что он будет взаимодействовать с C . elegans белков. МОН-2Н: 1–800 а.о .; MON-2C: 801–1648 а.о .; GBF-1N: 1–1147 а.о .; GBF-1C: 1148–1975 а.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s014
(EPS)
S15 Рис. Локализация hTAC :: GFP на РНКи кандидатных взаимодействующих белков SGK-1.
Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа, обработанных контрольными РНКи (A, A ‘), arl-1 RNAi (B, B’), gbf-1 RNAi (C, C ‘), мес. -2 RNAi (D, D ‘) и unc-11 RNAi (E, E’) и sgk-1 (ok538) мутантов (F, F ‘), экспрессирующих hTAC :: GFP.Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s015
(EPS)
S16 Рис. Локализация MIG-14 :: GFP на РНКи кандидатных взаимодействующих белков SGK-1.
Конфокальные изображения кишечных клеток червей дикого типа, обработанных контрольными РНКи (A, A ‘), arl-1 RNAi (B, B’), gbf-1 RNAi (C, C ‘), мес. -2 РНКи (D, D ‘) и unc-11 РНКи (E, E’) и sgk-1 (ok538) мутанты (F, F ‘), экспрессирующие MIG-14 :: GFP.Базолатеральные мембраны указаны стрелками. Масштабные линейки: 5 мкм.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0130778.s016
(EPS)
Благодарности
Мы хотели бы выразить нашу глубокую благодарность доктору Xiaochen Wang (NIBS) за предоставленные нам многие важные предложения и реактивы, а также Junbing Zhang за его поддержку. Мы благодарим докторов наук. Александр Сукас (Гарвардская медицинская школа), Ральф Баумейстер (Университет Альберта-Людвига), Анбин Ши (Медицинский университет Тунцзи), Тао Сюй (Институт биофизики Китайской академии наук) и Бин Лян (Институт зоологии Куньмина Китайской академии наук) ) для C . elegans штаммов. Некоторые штаммы были предоставлены CGC, финансируемым Управлением исследовательской инфраструктуры Национальных институтов здравоохранения (P40 OD010440). Мы благодарим докторов наук. Ли-Лин Ду, Хун Чжан, Чун-Линь Ян, Цзюнь Ли, Синь Ли за обсуждения и Вэнь-цзюнь Ли за помощь.
Вклад авторов
Задумал и спроектировал эксперименты: MZ M-QD. Проведены эксперименты: MZ GW Y-XL JKS C-XF. Проанализированы данные: MZ Y-XL JKS AS M-QD. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты для анализа: JKS C-XF AS.Написал статью: MZ AS M-QD.
Список литературы
- 1. Файерстоун Г.Л., Джампаоло-младший, О’Киф, Б.А. Стимул-зависимая регуляция транскрипции, субклеточной локализации и ферментативной активности сыворотки и глюкокортикоид-индуцибельной протеинкиназы (SGK). Клеточная физиология и биохимия. 2003. 13 (1): 1–12. pmid: 12649597
- 2. Вебстер М., Гойя Л., Файерстоун Г. Немедленно-ранняя регуляция транскрипции и быстрый оборот мРНК предполагаемой серин / треониновой протеинкиназы.Журнал биологической химии. 1993. 268 (16): 11482–5. pmid: 8505283
- 3. Webster MK, Goya L, Ge Y, Maiyar A, Firestone G. Характеристика sgk, нового члена семейства генов серин / треониновых протеинкиназ, который транскрипционно индуцируется глюкокортикоидами и сывороткой. Молекулярная и клеточная биология. 1993. 13 (4): 2031–2040. pmid: 8455596
- 4. Ланг Ф., Артунч Ф., Валлон В. Физиологическое влияние сывороточной и глюкокортикоид-индуцибельной киназы SGK1.Современное мнение в нефрологии и гипертонии. 2009; 18 (5): 439. pmid: 19584721
- 5. Lang F, Böhmer C, Palmada M, Seebohm G, Strutz-Seebohm N, Vallon V. (Patho) физиологическое значение изоформ киназ, индуцируемых сывороткой и глюкокортикоидами. Физиологические обзоры. 2006. 86 (4): 1151–78. pmid: 17015487
- 6. Faresse N, Lagnaz D, Debonneville A, Ismailji A, Maillard M, Fejes-Toth G и др. Индуцируемые почечно-специфические мыши с нокаутом Sgk1 обнаруживают фенотип потери соли.Американский журнал физиологии-физиологии почек. 2012; 302 (8): F977 – F85. pmid: 22301619
- 7. Леонг М.Л., Майяр А.С., Ким Б., О’Киф Б.А., Файерстоун Г.Л. Экспрессия протеинкиназы Sgk, индуцируемой сывороткой и глюкокортикоидами, является ответом на выживание клеток в эпителиальных клетках молочных желез на несколько типов стимулов стресса окружающей среды. Журнал биологической химии. 2003. 278 (8): 5871–82. pmid: 12488318
- 8. Лу М., Ван Дж., Джонс К.Т., Айвз Х.Э., Фельдман М.Э., Яо Л-Дж и др.mTOR complex-2 активирует ENaC, фосфорилируя SGK1. Журнал Американского общества нефрологов. 2010. 21 (5): 811–8. pmid: 20338997
- 9. Брюнет А., Парк Дж., Тран Х, Ху Л.С., Хеммингс Б.А., Гринберг М.Э. Протеинкиназа SGK опосредует сигналы выживания путем фосфорилирования фактора транскрипции вилки FKHRL1 (FOXO3a). Молекулярная и клеточная биология. 2001. 21 (3): 952–65. pmid: 11154281
- 10. БелАиба Р.С., Джорджевич Т., Бонелло С., Артунч Ф., Ланг Ф., Хесс Дж. И др.Киназа Sgk-1, индуцируемая сывороткой и глюкокортикоидами, участвует в ремоделировании легочных сосудов в окислительно-восстановительной регуляции тканевого фактора с помощью тромбина. Исследование кровообращения. 2006. 98 (6): 828–36. pmid: 16484615
- 11. Валлон V, Wyatt AW, Klingel K, Huang DY, Hussain A, Berchtold S и др. SGK1-зависимое формирование сердечного CTGF и фиброз после лечения DOCA. Журнал молекулярной медицины. 2006. 84 (5): 396–404. pmid: 16604333
- 12. Tai DJ, Su C-C, Ma Y-L, Lee EH.Фосфорилирование SGK1 киназы IκB α и p300 активирует активность NF-κB и увеличивает экспрессию NR2A и NR2B рецептора N-метил-d-аспартата. Журнал биологической химии. 2009. 284 (7): 4073–89. pmid: 176
- 13. Lang F, Vallon V. Сывороточная и глюкокортикоид-индуцибельная киназа 1 в регуляции почечного и внепочечного транспорта калия. Клиническая и экспериментальная нефрология. 2012. 16 (1): 73–80. pmid: 22038256
- 14. Ланг Ф., Шумилина Е. Регулирование ионных каналов с помощью сывороточной и глюкокортикоид-индуцибельной киназы SGK1.Журнал FASEB. 2013; 27 (1): 3–12.
- 15. Lang F, Stournaras C. Сыворотка и индуцируемая глюкокортикоидами киназа, метаболический синдром, воспаление и рост опухоли. Гормоны (Афины). 2013; 12: 160–71. pmid: 23933686
- 16. Бомбергер JM, Coutermarsh BA, Barnaby RL, Sato JD, Chapline MC, Stanton BA. Сыворотка и индуцируемая глюкокортикоидами киназа1 увеличивает wt-CFTR плазматической мембраны в эпителиальных клетках дыхательных путей человека, ингибируя его эндоцитозное восстановление. ПлоС один. 2014; 9 (2): e89599.pmid: 24586903
- 17. Гуджино В.Б., Стэнтон Б.А. Новое понимание муковисцидоза: молекулярные переключатели, регулирующие CFTR. Обзоры природы Молекулярная клеточная биология. 2006. 7 (6): 426–36. pmid: 16723978
- 18. Гольдштейн JL, Андерсон RG, Браун MS. Покрытые ямки, покрытые оболочкой везикулы и рецептор-опосредованный эндоцитоз. Природа. 1979. 279 (5715): 679–85. pmid: 221835
- 19. Максфилд FR, Макгроу TE. Эндоцитарный рециклинг. Обзоры природы Молекулярная клеточная биология.2004. 5 (2): 121–32. pmid: 15040445
- 20. Харфорд Дж., Бриджес К., Эшвелл Дж., Клауснер Р.Д. Внутриклеточная диссоциация асиалогликопротеинов, связанных с рецепторами, в культивируемых гепатоцитах. Нелизосомное событие, опосредованное pH. Журнал биологической химии. 1983; 258 (5): 3191–7. pmid: 6298227
- 21. Мукерджи С, Гош Р.Н., Максфилд Фр. Эндоцитоз 1997 1997-07-01 00:00:00. 759–803 с.
- 22. Меллман И. Эндоцитоз и молекулярная сортировка. Ежегодный обзор клеточной биологии и биологии развития.1996. 12 (1): 575–625.
- 23. Грант Б.Д., Дональдсон Дж. Г.. Пути и механизмы рециклинга эндоцитов. Обзоры природы Молекулярная клеточная биология. 2009. 10 (9): 597–608. pmid: 19696797
- 24. Бонифачино Дж. С., Рохас Р. Ретроградный транспорт от эндосом до сети транс-Гольджи. Обзоры природы Молекулярная клеточная биология. 2006; 7 (8): 568–79. pmid: 16936697
- 25. Roelants FM, Breslow DK, Muir A, Weissman JS, Thorner J. Протеинкиназа Ypk1 фосфорилирует регуляторные белки Orm1 и Orm2 для контроля гомеостаза сфинголипидов в Saccharomyces cerevisiae.Труды Национальной академии наук. 2011. 108 (48): 19222–7. pmid: 22080611
- 26. Мюир А., Рамачандран С., Ролантс Ф.М., Тиммонс Г., Торнер Дж. TORC2-зависимая протеинкиназа Ypk1 фосфорилирует церамидсинтазу для стимуляции синтеза сложных сфинголипидов. Элиф. 2014; 3: e03779.
- 27. Футерман А.Х., Стигер Б., Хаббард А., Пагано РЭ. Синтез сфингомиелина в печени крыс происходит преимущественно в цис- и медиальных цистернах аппарата Гольджи.Журнал биологической химии. 1990. 265 (15): 8650–7. pmid: 2187869
- 28. Zhang H, Abraham N, Khan LA, Hall DH, Fleming JT, Göbel V. Идентичность апикобазальных доменов расширяющихся трубчатых мембран зависит от биосинтеза гликосфинголипидов. Природа клеточной биологии. 2011; 13 (10): 1189–201. pmid: 21926990
- 29. Hertweck M, Göbel C, Baumeister R. C. elegans SGK-1 является критическим компонентом в киназном комплексе Akt / PKB для контроля реакции на стресс и продолжительности жизни.Клетка развития. 2004. 6 (4): 577–88. pmid: 15068796
- 30. Чен АТИ, Го Ц., Дюма К.Дж., Ашрафи К., Ху П.Дж. Влияние мутации sgk ‐ 1 Caenorhabditis elegans на продолжительность жизни, стрессоустойчивость и регуляцию DAF ‐ 16 / FoxO. Старение клетки. 2013; 12 (5): 932–40. pmid: 23786484
- 31. Chen D, Li PW-L, Goldstein BA, Cai W., Thomas EL, Chen F, et al. Передача сигналов зародышевой линии обеспечивает синергетическое увеличение продолжительности жизни, вызванное двойными мутациями в daf-2 и rsks-1 в C.elegans. Сотовые отчеты. 2013. 5 (6): 1600–10. pmid: 24332851
- 32. Сяо Р., Чжан Б., Дун И, Гун Дж, Сюй Т, Лю Дж и др. Генетическая программа способствует долголетию C. elegans при низких температурах через термочувствительный TRP-канал. Клетка. 2013. 152 (4): 806–17. pmid: 23415228
- 33. Ли Х, Чен Б., Йошина С., Цай Т., Ян Ф., Митани С. и др. Инактивация аминопептидазы DNPP-1 Caenorhabditis elegans восстанавливает эндоцитарную сортировку и рециклинг у мутантов tat-1.Молекулярная биология клетки. 2013; 24 (8): 1163–75. pmid: 23427264
- 34. Камат Р.С., Фрейзер А.Г., Донг Й., Пулин Дж., Дарбин Р., Готта М. и др. Систематический функциональный анализ генома Caenorhabditis elegans с использованием РНКи. Природа. 2003. 421 (6920): 231–7. pmid: 12529635
- 35. Xu T, Venable J, Park SK, Cociorva D, Lu B, Liao L, et al., Редакторы. ProLuCID, быстрая и чувствительная программа идентификации белков на основе тандемных масс-спектров. Молекулярная и клеточная протеомика; 2006: AMER SOC BIOCHEMISTRY MOLECULAR BIOLOGY INC 9650 ROCKVILLE PIKE, BETHESDA, MD 20814–3996 США.
- 36. Табб Д.Л., Макдональд У.Х., Йетс-младший. DTASelect и Contrast: инструменты для сборки и сравнения белков, идентифицированных с помощью протеомики дробовика. Журнал протеомных исследований. 2002. 1 (1): 21–6. pmid: 12643522
- 37. Sowa ME, Беннетт EJ, Gygi SP, Harper JW. Определение ландшафта взаимодействия деубиквитинирующих ферментов человека. Клетка. 2009. 138 (2): 389–403. pmid: 19615732
- 38. Vizcaíno JA, Deutsch EW, Wang R, Csordas A, Reisinger F, Rios D и др.ProteomeXchange обеспечивает глобально скоординированную передачу и распространение протеомных данных. Биотехнология природы. 2014; 32 (3): 223–6. pmid: 24727771
- 39. Такада Р., Сатоми Ю., Курата Т., Уэно Н., Нориока С., Кондо Х. и др. Модификация белка Wnt мононенасыщенными жирными кислотами: его роль в секреции Wnt. Клетка развития. 2006. 11 (6): 791–801. pmid: 17141155
- 40. Ян П-Т, Лоренович MJ, Силханкова M, Coudreuse DY, Betist MC, Korswagen HC. Передача сигналов Wnt требует ретромер-зависимой рециклинга MIG-14 / Wntless в Wnt-продуцирующих клетках.Клетка развития. 2008. 14 (1): 140–7. pmid: 18160347
- 41. Pan C-L, Baum PD, Gu M, Jorgensen EM, Clark SG, Garriga G. C. elegans AP-2 и Retromer Control Wnt Передача сигналов посредством регулирования MIG-14 / Wntless. Клетка развития. 2008. 14 (1): 132–9. pmid: 18160346
- 42. Ши А., Сун Л., Банерджи Р., Тобин М., Чжан И., Грант Б.Д. Регуляция эндосомного клатрина и ретромер-опосредованной эндосомы для ретроградного транспорта Гольджи с помощью J-домена белка RME-8. Журнал EMBO.2009. 28 (21): 3290–302. pmid: 19763082
- 43. Чен Б., Цзян Й., Цзэн С., Янь Дж., Ли Х, Чжан И и др. Эндоцитарная сортировка и рециркуляция требуют асимметрии мембранного фосфатидилсерина, поддерживаемой TAT-1 / CHAT-1. PLoS генетика. 2010; 6 (12): e1001235. pmid: 21170358
- 44. Chen CC-H, Schweinsberg PJ, Vashist S, Mareiniss DP, Lambie EJ, Grant BD. RAB-10 необходим для рециркуляции эндоцитов в кишечнике Caenorhabditis elegans. Молекулярная биология клетки. 2006. 17 (3): 1286–97.pmid: 16394106
- 45. Эйстер К.А., Хиггинсон Дж. Д., Хюбнер Р., Порат-Шлиом Н., Вейгерт Р., Ву В. В. и др. Открытие новых белков-карго, которые проникают в клетки посредством клатрин-независимого эндоцитоза. Движение. 2009. 10 (5): 590–9. pmid: 19302270
- 46. Номура К.Х., Мурата Д., Хаяси Й., Дедзима К., Мидзугути С., Каге-Накадаи Э. и др. Церамид глюкозилтрансфераза нематоды Caenorhabditis elegans участвует в образовании ооцитов и в раннем делении эмбриональных клеток. Гликобиология.2011; 21 (6): 834–48. pmid: 21325339
- 47. Rothbauer U, Zolghadr K, Muyldermans S, Schepers A, Cardoso MC, Leonhardt H. Универсальная наноловушка для биохимических и функциональных исследований с флуоресцентными гибридными белками. Молекулярная и клеточная протеомика. 2008. 7 (2): 282–9.
- 48. Хейнс Л.П., Шервуд М.В., Долман, штат Нью-Джерси, Бургойн, РД. Специфичность, неоднородность и локализация взаимодействий белка ARF с NCS-1 и фосфатидилинозитол-4 киназой-IIIβ. Движение. 2007. 8 (8): 1080–92.pmid: 17555535
- 49. Morinaga N, Tsai S-C, Moss J, Vaughan M. Выделение белка обмена гуаниновых нуклеотидов, ингибируемого брефельдином A, на фактор рибозилирования ADP (ARF) 1 и ARF3, который содержит Sec7-подобный домен. Труды Национальной академии наук. 1996. 93 (23): 12856–60. pmid: 8917509
- 50. Ackema KB, Sauder U, Solinger JA, Spang A. ArfGEF GBF-1 необходим для структуры ER, секреции и эндоцитозного транспорта у C. elegans. ПлоС один. 2013; 8 (6): e67076.pmid: 23840591
- 51. Суворова Е.С., Куртен Р.С., Лупашин В.В. Идентификация человеческого ортолога Sec34p как компонента механизма связывания цис-Гольджи везикул. Журнал биологической химии. 2001. 276 (25): 22810–8. pmid: 11292827
- 52. Efe JA, Plattner F, Hulo N, Kressler D, Emr SD, Deloche O. Дрожжи Mon2p — это высококонсервативный белок, который функционирует в пути транспорта цитоплазмы в вакуоль и необходим для гомеостаза Гольджи. Журнал клеточной науки.2005. 118 (20): 4751–64. pmid: 16219684
- 53. Нонет М.Л., Холгадо А.М., Брюер Ф., Серпе С.Дж., Норбек Б.А., Холлеран Дж. И др. UNC-11, гомолог AP180 Caenorhabditis elegans, регулирует размер и белковый состав синаптических везикул. Молекулярная биология клетки. 1999. 10 (7): 2343–60. pmid: 10397769
- 54. Кубота Ю., Сано М., Года С., Сузуки Н., Нишиваки К. Консервативный олигомерный комплекс Гольджи действует в морфогенезе органов через гликозилирование протеазы ADAM в C.elegans. Разработка. 2006. 133 (2): 263–73. pmid: 16354716
- 55. Аподака Г, Кац Л.А., Мостов К.Е. Рецептор-опосредованный трансцитоз IgA в клетках MDCK происходит посредством апикальной рециклинга эндосом. Журнал клеточной биологии. 1994. 125 (1): 67–86. pmid: 8138576
- 56. Читвуд DJ, Лусби WR, Томпсон MJ, Кочанский JP, Ховарт О.В. Гликозилцерамиды нематоды Caenorhabditis elegans содержат необычное сфингоидное основание с разветвленной цепью. Липиды. 1995. 30 (6): 567–73. pmid: 7651085
- 57.Zhu H, Shen H, Sewell AK, Kniazeva M, Han M. Новый путь сфинголипид-TORC1 критически способствует постэмбриональному развитию у Caenorhabditis elegans. Элиф. 2013; 2: e00429. pmid: 23705068
- 58. Menuz V, Howell KS, Gentina S, Epstein S, Riezman I., Fornallaz-Mulhauser M, et al. Защита C. elegans от аноксии керамидсинтазой HYL-2. Наука. 2009. 324 (5925): 381–4. pmid: 19372430
- 59. Ли Дж, Юй, Суо Ф, Сунь Л-Л, Чжао Д., Ду Л-Л. Полногеномные экраны на чувствительность к ионизирующему излучению выявляют негомологичный фактор присоединения концов делящихся дрожжей Xrc4.G3: Гены | Геномы | Генетика. 2014. 4 (7): 1297–306. pmid: 24847916
Антитело SGK
Ограниченное использование
За исключением случаев, когда иное прямо согласовано в письменной форме, подписанной законным представителем CST, следующие условия: применяются к Продуктам, предоставляемым CST, ее аффилированными лицами или ее дистрибьюторами. Любые условия и положения Заказчика, указанные в дополняют или отличаются от содержащихся в настоящем документе, если иное не принято в письменной форме юридически уполномоченным представитель CST, отклоняются и не имеют силы.
Продукты имеют маркировку «Только для исследовательского использования» или аналогичное заявление о маркировке и не были одобрены, одобрены или лицензированы. FDA или другой регулирующей иностранной или отечественной организацией для любых целей. Заказчик не должен использовать какой-либо Продукт для диагностики. или в терапевтических целях, или иным образом любым способом, который противоречит заявлению на этикетке. Продукты, продаваемые или лицензируемые CST предоставляются Заказчику как конечному пользователю и исключительно для использования в исследованиях и разработках.Любое использование Продукта для диагностики, в профилактических или терапевтических целях, или любая покупка Продукта для перепродажи (отдельно или в качестве компонента) или в других коммерческих целях, требуется отдельная лицензия от CST. Клиент обязуется (а) не продавать, лицензировать, ссужать, жертвовать или иным образом передавать или предоставлять любой Продукт для любой третьей стороны, отдельно или в сочетании с другими материалами, или использовать Продукты для производства любых коммерческие продукты, (б) не копировать, изменять, реконструировать, декомпилировать, дизассемблировать или иным образом пытаться обнаружить лежащие в основе структуру или технологию Продуктов, или использовать Продукты с целью разработки любых продуктов или услуг, которые конкурировать с продуктами или услугами CST, (c) не изменять и не удалять из Продуктов какие-либо товарные знаки, торговые наименования, логотипы, патенты или уведомления об авторских правах или маркировка, (d) использовать Продукты исключительно в соответствии с Условия продажи продуктов CST и любые применимые документации, и (e) соблюдать любую лицензию, условия обслуживания или аналогичное соглашение в отношении любых сторонних продуктов или услуги, используемые Клиентом в связи с Продуктами.
Глюкокортикоид-индуцибельная киназа (SGK) -1 в сыворотке крови защищает эндотелиальные клетки от окислительного стресса и апоптоза, вызванного гипергликемией.
Verma S, Buchanan MR, Anderson TJ (2003) Тестирование функции эндотелия как биомаркер сосудистых заболеваний. Тираж 108: 2054–2059
PubMed Статья Google ученый
Гриндлинг К.К., Фитцджеральд Г.А. (2003) Окислительный стресс и сердечно-сосудистое повреждение: часть I: основные механизмы и мониторинг АФК in vivo.Тираж 108: 1912–1916
PubMed Статья Google ученый
Баккер В., Эринга ЕС, Сипкема П., ван Хинсберг В.В. (2009) Эндотелиальная дисфункция и диабет: роль гипергликемии, нарушения передачи сигналов инсулина и ожирения. Cell Tissue Res 335: 165–189
CAS PubMed Статья Google ученый
Lang F, Artunc F, Vallon V (2009) Физиологическое воздействие сыворотки и глюкокортикоид-индуцибельной киназы SGK1.Curr Opin Nephrol Hypertens 18: 439–448
CAS PubMed Central PubMed Статья Google ученый
Энгельсберг А., Кобельт Ф., Кул Д. (2006) N-конец сывороточной и глюкокортикоид-индуцибельной киназы Sgk1 определяет митохондриальную локализацию и быстрый оборот. Biochem J 399: 69–76
CAS PubMed Central PubMed Статья Google ученый
Waldegger S, Barth P, Raber G, Lang F (1997) Клонирование и характеристика предполагаемой серин / треониновой протеинкиназы человека, транскрипционно модифицированной во время анизотонических и изотонических изменений объема клетки. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4440–4445
CAS PubMed Central PubMed Статья Google ученый
Failor KL, Desyatnikov Y, Finger LA, Firestone GL (2007) Глюкокортикоид-индуцированная деградация белка киназы-3 гликогенсинтазы запускается сывороткой и глюкокортикоид-индуцированной протеинкиназой и передачей сигналов Akt и контролирует бета-катенин. динамика и образование плотных контактов в эпителиальных опухолевых клетках молочной железы.Mol Endocrinol 21: 2403–2415
CAS PubMed Статья Google ученый
Garcia-Martinez JM, Alessi DR (2008) mTOR комплекс 2 (mTORC2) контролирует фосфорилирование гидрофобных мотивов и активацию протеинкиназы 1 (SGK1), индуцированной сывороткой и глюкокортикоидами. Biochem J 416: 375–385
CAS PubMed Статья Google ученый
Helms MN, Yu L, Malik B, Kleinhenz DJ, Hart CM, Eaton DC (2005) Роль SGK1 в ингибировании оксида азота ENaC в эпителии, транспортирующем Na + .Am J Physiol Cell Physiol 289 (3): C717 – C726
CAS PubMed Статья Google ученый
Tessier M, Woodgett JR (2006) Сывороточные и регулируемые глюкокортикоидами протеинкиназы: вариации на тему. J Cell Biochem 98: 1391–1407
CAS PubMed Статья Google ученый
Boini KM, Hennige AM, Huang DY, Friedrich B, Palmada M, Boehmer C, Grahammer F, Artunc F, Ullrich S, Avram D, Osswald H, Wulff P, Kuhl D, Vallon V, Haring HU , Lang F (2006) Киназа 1, индуцируемая сывороткой и глюкокортикоидами, опосредует солевую чувствительность толерантности к глюкозе.Диабет 55: 2059–2066
CAS PubMed Статья Google ученый
Turpaev K, Bouton C, Diet A, Glatigny A, Drapier JC (2005) Анализ дифференциально экспрессируемых генов в моноцитарных клетках человека, подвергшихся воздействию оксида азота. Free Radic Biol Med 38 (10): 1392–1400
CAS PubMed Статья Google ученый
Дуан В., Пака Л., Пилларисетти С. (2005) Отчетливые эффекты глюкозы и глюкозамина на эндотелиальные и гладкомышечные клетки сосудов: доказательства защитной роли глюкозамина при атеросклерозе.Кардиоваск Диабетол 5 (4): 16
Артикул Google ученый
Р. Пост, Ак Сен, Ас Розенталь (1965) Фосфорилированный промежуточный продукт в аденозинтрифосфат-зависимом транспорте натрия и калия через почечные мембраны. J Biol Chem 240: 1437–1445
Google ученый
Handa O, Stephen J, Cepinskas G (2008) Роль оксида азота, производного от эндотелиального оксида азота, синтазы, в активации и дисфункции цереброваскулярных эндотелиальных клеток во время раннего начала сепсиса.Am J Physiol Heart Circ Physiol 295 (4): h2712 – h2719. DOI: 10.1152 / ajpheart.00476.2008
CAS PubMed Central PubMed Статья Google ученый
Mikosz CA, Brickley DR, Sharkey MS, Moran TW, Conzen SD (2001) Опосредованная глюкокортикоидным рецептором защита от апоптоза связана с индукцией гена серин / треониновой киназы выживания, SGK-1. J Biol Chem 276 (20): 16649–16654
CAS PubMed Статья Google ученый
Palmada M, Boehmer C, Akel A, Rajamanickam J, Jeyaraj S, Keller K, Lang F (2006) Киназа SGK1 активирует активность GLUT1 и экспрессию плазматической мембраны. Диабет 55: 421–427
CAS PubMed Статья Google ученый
Альварес де ла Роса Д., Корик Т., Тодорович Н., Шао Д., Ван Т., Канесса С.М. (2003) Распределение и регуляция экспрессии киназы-1, индуцированной сывороткой и глюкокортикоидами, в почках крысы. J Physiol 551 (Pt 2): 455–466
CAS PubMed Статья Google ученый
Brownlee M (2005) Патобиология диабетических осложнений: объединяющий механизм. Диабет 54: 1615–1625
CAS PubMed Статья Google ученый
Фен Й, Ван Й, Сюн Дж, Лю З., Ярд Б., Ланг Ф (2006) Повышенная экспрессия сывороточной и индуцируемой глюкокортикоидами киназы-1 в почках крыс, получавших L-NAME. Почечный кровяный пресс Res 29 (2): 94–99
CAS PubMed Статья Google ученый
Li H, Horke S, Förstermann U (2013) Окислительный стресс при сосудистых заболеваниях и его фармакологическая профилактика. Тенденции Pharmacol Sci 34 (6): 313–319. DOI: 10.1016 / j.tips.2013.03.007
PubMed Статья Google ученый
Schoenebeck B, Bader V, Zhu XR, Schmitz B, Lübbert H, Stichel CC (2005) SGK1, ответ выживания клеток при нейродегенеративных заболеваниях. Mol Cell Neurosci 30 (2): 249–264
CAS PubMed Статья Google ученый
Brunet A, Park J, Tran H, Hu LS, Hemmings BA, Greenberg ME (2001) Протеинкиназа SGK опосредует сигналы выживания путем фосфорилирования фактора транскрипции вилки FKHRL1 (FOXO3a). Mol Cell Biol 21 (3): 952–965
CAS PubMed Central PubMed Статья Google ученый
Dehner M, Hadjihannas M, Weiske J, Huber O, Behrens J (2008) Передача сигналов Wnt ингибирует транскрипцию и апоптоз, индуцируемые вилочным блоком O3a, за счет активации сывороточной и индуцируемой глюкокортикоидами киназы 1.J Biol Chem 283 (28): 19201–19210
CAS PubMed Статья Google ученый
Кемени С.Ф., Фигероа Д.С., Клайн А.М. (2013) Гипо- и гипергликемия нарушают выравнивание актина эндотелиальных клеток и активацию синтазы оксида азота в ответ на напряжение сдвига. PLoS ONE 8 (6): e66176. DOI: 10.1371 / journal.pone.0066176
CAS PubMed Central PubMed Статья Google ученый
Kliche K, Jeggle P, Pavenstädt H, Oberleithner H (2011) Роль клеточной механики в функции и продолжительности жизни сосудистого эндотелия. Арка Пфлюгерса 462 (2): 209–217. DOI: 10.1007 / s00424-011-0929-2
CAS PubMed Статья Google ученый
Белтовски Дж., Раханьчик Дж., Влодарчик М. (2013) Задержка жидкости, вызванная тиазолидиндионом: недавнее понимание молекулярных механизмов. PPAR Res 2013: 628628.DOI: 10.1155 / 2013/628628
PubMed Central PubMed Google ученый
Schwab M, Lupescu A, Mota M, Mota E, Frey A, Simon P, Mertens PR, Floege J, Luft F, Asante-Poku S, Schaeffeler E, Lang F (2008) Ассоциация гена SGK1 полиморфизмы при сахарном диабете 2 типа. Cell Physiol Biochem 21 (1–3): 151–160. DOI: 10.1159 / 000113757
CAS PubMed Статья Google ученый