Нередко мусор обладает химической активностью и запускает негативные реакции, включая гниение. Такой процесс привлекает насекомых и микроорганизмы, которые приступают к точению брусчатки.

Для заделки швов на покрытии плитки необходимо подготовить такие инструменты:

1. Резиновый шпатель. Для подобной работы лучше выбирать узкую модель, но его ширина определяется в зависимости от специфики щелей. Так, если они длинные и непрерывные, лучше брать широкую модель. Главное, чтобы шпатель не повреждал покрытие.
2. Сито. С его помощью будет просеиваться песок для заделки швов.
3. Бетономешалка. Если агрегат отсутствует, можно воспользоваться любой емкостью и строительным миксером с насадкой.
4. Лопата и емкость.
5. Веник.
6. Ведра и шланг.

В качестве материалов для заделывания швов используется песок или цемент (можно совмещать материалы, создавая смесь ЦПС или ПЦС), а также вода. После подготовки всех инструментов и материалов можно переходить к основной работе.

границ | Очистка капсульных полисахаридов Streptococcus pneumoniae: традиционные и новые методы

Введение

Streptococcus pneumoniae — патоген, который был впервые выделен Луи Пастером и Джорджем Стернберном независимо в 1880 году (Grabenstein and Klugman, 2012). Спустя годы эти бактерии были признаны основным возбудителем пневмонии и способными вызывать менингит, средний отит и другие инфекционные заболевания. Во многих слаборазвитых странах пневмония, вызванная S.pneumoniae — это бактериальное заболевание, ответственное за основную долю смертей среди детей в возрасте до 5 лет и взрослых старше 50 лет (Blasi et al., 2012).

S. pneumoniae поражает исключительно людей, а его экологическая ниша — носоглотка, поскольку в природе нет другого резервуара. Путь передачи пневмококка — через капли слюны от носителей или пациентов. Пневмококк — это организм, чувствительный к жаре, холоду и высыханию; следовательно, передача требует тесного контакта от человека к человеку.Он характеризуется частотой, с которой он колонизирует, и к тому времени, когда он может оставаться в носоглотке, не вызывая заболевания (Marchisio et al., 2002; Wattal et al., 2007). Носители могут нести разные серотипы одновременно или в разное время, непрерывно или периодически (Lipsitch et al., 2005).

S. pneumoniae представляют собой инкапсулированные аэротолерантные анаэробные грамположительные бактерии (Auzat et al., 1999). Они неподвижны, не образуют спор и способны использовать широкий спектр углеводов в качестве источников углерода (Bidossi et al., 2012). Микроскопически S. pneumoniae выглядят как ланцетные диплококки, часто сгруппированные в короткие цепочки, а макроскопически они представляют собой светлые α-гемолитические круглые колонии. Капсульный полисахарид (CPS) составляет самый внешний слой бактериальной клетки и является основным фактором вирулентности (Martens et al., 2004).

Этот патоген имеет большое количество различных иммунологических типов, различающихся по их CPS. Идентифицировано около 97 различных конкретных типов (Geno et al., 2015). Существует два типа систем классификации, основанных на серологических отношениях: американская система (Henrichsen, 1995) и датская система (Lund, 1963).

В дополнение к CPS, S. pneumoniae имеет другие факторы вирулентности, которые действуют на распад и лизис пневмококковых бактерий (автолизин), активируя комплементы и усиливая воспаление (пептидогликан, полисахариды клеточной стенки и пневмолизин), ингибируя комплемент. активация (PspA и PspC) и др.(Mitchell et al., 1991; Neeleman et al., 1999). Недавний скрининг сывороток пациентов с пневмонией позволил идентифицировать два новых поверхностных белка пневмококка в качестве потенциальных антигенов, а именно PcsB, белок, необходимый для разделения клеточной стенки, и StkP, серин-треониновую протеинкиназу. Оба являются высококонсервативными белками (Daniels et al., 2016).

Хотя S . pneumoniae считается в основном чувствительным к пенициллину и другим антимикробным агентам, появление устойчивых штаммов во всем мире затруднило лечение заболеваний, вызванных этим этиологическим агентом (Kim et al., 2016). Взрослые и дети старше 5 лет способны развить иммунитет против S . пневмония — в результате перенесенной инфекции или вакцинации. Развиваемый таким образом иммунитет обеспечивает защиту от последующих инфекций (Koskela, 1987). Разнообразие серотипов и замещение серотипов представляют собой основные проблемы при разработке более эффективных вакцин (Daniels et al., 2016; Balsells et al., 2017). Даже если вакцина успешно разработана для конкретного региона, может произойти последующая замена серотипов, нацеленных на вакцину, на невакцинные серотипы, что со временем минимизирует охват и эффективность вакцины (Geno et al., 2015).

Состав CPS

Капсульные полисахариды S. pneumoniae были выделены в 1916 г. Дочезом и Эйвери. Спустя несколько лет капсульные антигены были созданы как основа серотипов пневмококковых бактерий (Grabenstein, Klugman, 2012). В 1930-х годах была установлена ​​критическая иммуногенная роль пневмококковых CPS как фактора вирулентности (Grabenstein and Klugman, 2012).

Пневмококковая капсула CPS — это поверхностная структура, состоящая из слизистого или вязкого материала, расположенная вне клеточной стенки.Он защищает патоген от защитных механизмов хозяина (Alonso et al., 1995). Материал капсулы состоит из высокомолекулярного полимера, состоящего из повторяющихся звеньев олигосахаридов, связанных ковалентными связями с клеточной стенкой (Yother, 2011). Вирулентность и инвазивность штаммов пневмококков варьируются в зависимости от серотипов и зависят от химического состава и количества продуцируемых CPS (Zafar et al., 2017). Эти различия определяют выживаемость бактерий, попавших в циркуляцию, и возможность вызывать инвазивные заболевания (Watson and Musher, 1990).Некоторые капсулы сильно полярны и гидрофильны, что мешает взаимодействию между бактериями и фагоцитами. Исследования химической структуры этого антигена показывают, что большинство типов содержат отрицательно заряженную капсулу (за исключением серотипов 7 и 14, которые являются нейтральными) и кислотные компоненты, такие как глюкуроновая кислота (в типах 1, 2, 3, 5, 8, 9A, и 9V) или фосфат в фосфодиэфирных связях (в типах 6A, 6B, 11A, 15F, 19F, 19A и 23F) (Jansson et al., 1985).

Капсула синтезируется быстро и широко во время логарифмической фазы роста бактерий с помощью аналогичных механизмов у большинства видов Streptococcus .В S. pneumoniae биосинтез, как полагают, происходит за счет образования повторяющихся единиц, прикрепленных к липиду-носителю, который синтезируется на внутриклеточной стороне мембраны. Затем измененный липид-носитель экспортируется на поверхность, где повторяющиеся звенья олигосахаридов полимеризуются (Kolkman et al., 1997; Yother, 2011). В какой-то момент во время полимеризации капсула ковалентно прикрепляется к клеточной стенке, предположительно за счет связывания через глюкозу на восстанавливающем конце CPS и остатки β-D-N-ацетилглюкозамина пептидогликана (Larson and Yother, 2017).Эта общая организация была идентифицирована в капсульных локусах всех известных серотипов, за исключением серотипов 3 и 37, которые синтезируются по другому механизму, который не зависит от липидного носителя (Cartee et al., 2000; Geno et al., 2015 ). Гены капсулы организованы в виде кассет, содержащих области генов, которые кодируют функции, необходимые для производства конкретных капсульных структур, и связаны с другими областями генов, общими для капсул всех серотипов (Bentley et al., 2006; Wu et al., 2016). Эти общие области, обнаруженные почти во всех типах капсул, включают 4 гена, cpsA, cpsB, cpsC и cpsD (Guidolin et al., 1994; Morona et al., 1997), которые кодируют белки, необходимые для производства или регуляции капсулы. Структурные свойства каждой CPS (такие как функциональные группы на углеводородной основе) или количество полимерных цепей являются ключевыми факторами, определяющими биологическую функцию и стратегию очистки (Cartee et al., 2000; Gonçalves et al., 2007).

Важность очистки CPS связана с разработкой нового поколения S.pneumoniae , состоящие только из CPS или конъюгированных с белками. Шиман и Каспер обнаружили иммуногенность CPS (Grabenstein and Klugman, 2012) в 1927 году. Несколько лет спустя Эйвери улучшил иммуногенность путем ковалентного связывания CPS с белками, а Фелтон показал, что чистые пневмококковые полисахариды индуцируют выработку антител у людей (Grabenstein and Klugman , 2012). Потребовалось много десятилетий, чтобы эта разработка приобрела практическую клиническую ценность.

Методы очистки

Процедуры разделения и очистки полимеров были разработаны и применяются во многих важных областях, таких как производство, фармацевтика и медицина, благодаря их интересной биологической активности.Высокая чистота, необходимая для полисахаридов, используемых в медицине и производстве лекарств, привела к разработке новых методов очистки, основанных на фракционном осаждении, ионообменной хроматографии, гель-фильтрации и аффинной хроматографии (Khodakarami and Alagha, 2017; Li et al., 2017) .

Было опубликовано несколько статей или патентов, касающихся очистки S. pneumoniae CPS. Они обычно описывают модификации предшествующих процедур, которые облегчают последующую очистку.После ферментации желаемого серотипа большинство авторов собирают клеточные культуры центрифугированием и лизируют клетки с помощью дезоксихолата натрия (Jung et al., 2011). Другие авторы добавляли дезоксихолат натрия после ферментации, но перед сбором клеток и получением CPS из супернатанта или фильтрата (Macha et al., 2014). Занардо и его коллеги предпочитают инактивировать бактерии тимеросалом и удалять клетки фильтрацией, потому что лизирование детергентом разрушает клеточные мембраны, высвобождая большие количества внутриклеточных загрязнителей, которые затрудняют процесс очистки (Занардо и др., 2016). Основные загрязнители, требующие отделения, включают белки, нуклеиновые кислоты и углеводы клеточной стенки (C-углеводы). По данным Всемирной организации здравоохранения, желаемое количество примесей белков и нуклеиновых кислот составляет <3 и 2% соответственно (ВОЗ, 2009). Первые патенты, связанные с очисткой CPS, совпали с разработкой и производством первых вакцин против углеводных антигенов капсулы. Большинство процессов очистки CPS включают одно или несколько осаждений этанолом.Типы CPS названы в соответствии с датской системой (Lund, 1963).

На рисунке 1 показана блок-схема очистки CPS типа 1, предложенная Cano et al. (1979). Общий процесс подходит для 16 типов капсульных полисахаридов пневмококка (1, 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 12F, 14, 18C, 19F, 20, 23F и 25), с некоторыми модификациями между типы. В общем, все методы очистки включают осаждение этанолом, осаждение бромидом гексадецилтриметиламмония (цетавлон) и очистку с использованием активированного угля.Для некоторых типов CPS также включено осаждение сульфатом аммония. Авторы сообщили, что процессы удалили более 99% загрязняющих белков, нуклеиновых кислот и С-углеводов, сохранив при этом иммуногенность продукта. Многие из процедурных шагов сложны и требуют времени; например, для удаления цетавлона требуется тщательная промывка для удаления всех остатков. К сожалению, несмотря на количество зарегистрированных патентов, результатов по выходам или конечной чистоте не сообщалось.

Рисунок 1 . Блок-схема процесса очистки CPS типа 1, предложенная Cano et al. (1979). Метод очистки включает осаждение этанолом, осаждение бромидом гексадецилтриметиламмония (цетавлон) и очистку активированным углем. Процесс удалил более 99% загрязняющих белков, нуклеиновых кислот и С-углеводов, сохранив при этом иммуногенность продукта.

В том же году патент представлен компанией Merck (Carlo et al., 1979) описал процесс очистки полисахаридов, который включает осаждение этанолом, изопропанолом и бромидом цетримония, обработку протеазами и нуклеазами и, при необходимости, диализ для удаления любых оставшихся загрязнителей. Из 14 л культуры эти авторы смогли извлечь от 0,35 г (тип 1) до 4,6 г (тип 2) очищенного CPS.

В 1980-х годах Институт Мерье запатентовал другой классический способ очистки полисахаридов для S. pneumoniae (Merieux et al., 1981).В патенте описывается очистка 17 CPS S. pneumoniae . При применении полусинтетической среды к промышленной культуре S. pneumonia процесс очистки включает осаждение этанолом, экстракцию фенола и очистку с использованием активированного угля с некоторыми вариациями в зависимости от типа CPS. Чистота и выход варьируются в зависимости от типа CPS и начального объема культуры, но аналогичны тем, о которых сообщалось в ранее зарегистрированных патентах. Например, восстановление 0.4, 0,3 и 0,1 г / л получены для КПС типа 1, 2 и 4 соответственно. Стоит отметить, что в этом патенте используется полусинтетическая среда, что подчеркивает важность культуральной среды в определении чистоты полисахарида в конце процесса.

В 1998 г. Арнольд и др. запатентовал метод очистки без осаждения этанолом (Arnold and Soika, 1998) для 23 типов CPS (1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F , 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F).Процесс включает осаждение бромида гексадецилтриметиламмония и хроматографию на гидроксиапатите (HA). Авторы обнаружили, что все типы пневмококковых полисахаридов преципитируют 1–4%, за исключением пневмококковых CPS типов 7F, 14 и 33F. Поскольку осаждение гексадецилтриметиламмонием основано на взаимодействии между положительными зарядами детергента и отрицательными зарядами CPS, CPS типов 7F, 14 и 33F не осаждаются из-за их нейтральных свойств; поэтому была добавлена ​​дополнительная стадия колоночной хроматографии с Q-анионообменом.Авторы сообщили об удалении 95% примесей как белков, так и нуклеиновых кислот по сравнению с показателями сырого лизата, но не сообщили об окончательных выходах или чистоте.

В целом, эти классические процессы подчеркивают важность устранения загрязняющих веществ и недостатки использования определенных токсичных реагентов, таких как фенол (во время процесса) или DOC (для лизиса клеток), которые высвобождают обильные внутриклеточные загрязнители во внеклеточную среду. Как следствие, добавление новых стадий очистки для удаления этих загрязнителей увеличивает сложность процесса, уменьшая конечный выход и увеличивая экономические затраты.

Новые методы очистки капсул были протестированы для достижения более высоких выходов и чистоты. Хотя некоторые утомительные шаги были устранены или заменены, многоступенчатая процедура все еще используется. Недавно были разработаны новые методы очистки, направленные на достижение более высокой чистоты и выхода CPS с помощью упрощенного рабочего процесса (Таблица 1). Большинство из них специфичны только для одного типа CPS, но они могут быть адаптированы для других типов со схожими физико-химическими свойствами.

Таблица 1 .Процессы очистки CPS.

Недавно Gonçalves et al. (2003, 2007) предложили процесс очистки серотипа 23F, который состоит из концентрирования тангенциальной ультрафильтрацией (30 кДа), фракционного осаждения этанолом (28-60%), обработки нуклеазами и протеиназами и концентрации / диафильтрации с помощью кассеты 30 кДа. . Авторы достигли конечного извлечения полисахаридов 89%, с загрязнением белками и нуклеотидами <2%. Интересно, что эти авторы также разработали новый процесс периодического культивирования для получения высокого уровня полисахаридов этого серотипа с использованием фракции супернатанта, тем самым избегая использования всей культуры (Gonçalves et al., 2002). Этот процесс позволяет производить крупномасштабное производство CPS и упростить последующий процесс.

Несколькими годами позже Jung et al. (2011) предложили упрощенную процедуру очистки серотипа 19А, которая включала доведение pH клеточного лизата до 4,5, фракционирование 50–80% этанолом и, наконец, диализ. Процесс CPS был завершен менее чем за 48 часов, что значительно короче по сравнению с другими опубликованными процедурами. Авторы достигли выхода 75% и чистоты 97% в конце процесса.Использование кислого pH для осаждения растворимых белков или других растворимых компонентов в начале процесса очистки значительно улучшило чистоту конечного продукта; однако эта процедура применима только к кислотоустойчивым полисахаридам.

Macha и его коллеги предложили упрощенный метод очистки для CPS типов 3, 6B, 14, 19F и 23F, который использует лизис детергентом с последующим концентрированием, осаждением этанолом, адсорбцией фосфата алюминия и диафильтрацией с помощью системы фильтрации с тангенциальным потоком 300 кДа.В результате процент технологических примесей был <1,5%, а степень извлечения составляла 65–80% (Macha et al., 2014). Преимущество этого метода заключается в том, что он заменяет осаждение фенолом и использование нуклеаз и протеаз адсорбцией и ультрафильтрацией AlPO ₄ . Авторы сообщили, что AlPO ₄ способен разделять два отрицательно заряженных соединения (например, CPS и эндотоксин) путем избирательного связывания с эндотоксинами и отделения их от CPS.

Кроме того, Занардо и его коллеги оценили новый процесс очистки серотипа 14 (Занардо и др., 2016), анализируя три стратегии очистки, состоящие из следующих этапов: разделение клеток тангенциальной микрофильтрацией, концентрирование тангенциальной ультрафильтрацией (50 кДа), диафильтрация в присутствии додецилсульфата натрия с использованием ультрафильтрационной мембраны 30 кДа, осаждение 5% трихлоруксусной кислоты. кислота, осаждение 20 и 60% этанолом и анионообменная хроматография. Все процессы достигли требуемой чистоты в отношении нуклеиновых кислот (≤ 2%) и белков (≤ 3%). Окончательное извлечение CPS составило от 35 до 60%.

Одностадийный метод аффинной хроматографии (лектины) был разработан Suárez et al. (2001) в лабораторном масштабе для серотипа 14. Этот метод имеет преимущества перед другими, заключающиеся в простоте процедуры очистки и в большей скорости по сравнению с традиционными многоступенчатыми методами. Эти авторы достигли значений чистоты выше 99%, что является довольно высоким показателем, учитывая, что дезоксихолат использовался для лизирования клеток. Тем не менее, возможности метода были ограничены несколькими миллиграммами CPS, и масштабирование процедуры могло быть довольно дорогостоящим.

Заключение

Очистка CPS необходима для приготовления вакцин против S. pneumoniae , независимо от того, состоят ли эти вакцины только из CPS или CPS, конъюгированных с белками. Такие вакцины эффективны и безопасны, но остаются довольно дорогими. Достижения в методах очистки CPS направлены на улучшение качества и выхода, а также на упрощение процесса.

Хотя некоторые изменения в предшествующем процессе привели к упрощению процесса очистки, на этапе лизиса клеток разрушаются клеточные мембраны и высвобождаются внутриклеточные загрязнения.Таким образом, Занардо и его коллеги предпочли инактивировать бактерии с помощью тимеросала и удалить клетки фильтрацией (Zanardo et al., 2016). Использование непрерывного культивирования и сред с определенным химическим составом также способствует упрощению последующего процесса (Zanardo et al., 2016). Оптимизация производства CPS путем корректировки состава питательной среды и условий культивирования остается важной областью исследований для повышения урожайности и чистоты полисахаридных продуктов (Zhang and Robinson, 2005; Marthos et al., 2015; Мораис и Суарес, 2016).

Желательно, чтобы СПС для производства вакцины были как можно более однородными с точки зрения химического состава и молекулярной массы. Роль питательной среды в синтезе CPS остается интересным направлением для будущих исследований.

В целом, процессы очистки CPS, разработанные для S. pneumoniae, Haemophilus influenza типа b и Neisseria meningitides в последние десятилетия, повысили эффективность за счет уменьшения количества используемых осаждений этанолом и отказа от использования фенола (Suárez et al. al., 2001; Пато и др., 2006; Gonçalves et al., 2007; Альбани и др., 2012, 2015; Шарма и др., 2015). В частности, для Neisseria meningitidis , Tanizaki et al. (1996) предложили модификацию классического процесса очистки полисахаридов менингококковой группы С путем замены стадии экстракции фенолом расщеплением протеазами и обширной диафильтрацией. Пато и др. (2006) сообщили о новом подходе, включающем непрерывное центрифугирование надосадочной жидкости, тангенциальную фильтрацию, анионообменную хроматографию и эксклюзионную хроматографию, которая улучшает выход и качество полисахарида.

Недавно Шарма и его сотрудники попытались упростить процесс очистки бактериальных полисахаридов для серогрупп A и C из N. meningitidis , используя O-ацетилирование и хроматографию гидрофобного взаимодействия (HIC), с хорошими результатами (Sharma et al., 2015) .

В случае капсульного полисахарида Haemophilus influenzae типа b (Hib), Albani et al. (2012) сообщили о процедуре очистки, основанной на тангенциальной ультрафильтрации, осаждении этанолом и ферментативном гидролизе.Эта стратегия исключает фенол и сокращает количество стадий осаждения этанолом. Позже авторы предложили модификацию процесса путем введения тангенциальной микрофильтрации вместо центрифугирования, что привело к улучшению качества полисахарида. Таким образом, все модификации процесса, предложенные этими авторами, могут быть исследованы для очистки пневмококковой CPS.

В частности, для S. pneumoniae в последующих процедурах очистки обычно используется осаждение этанолом плюс стадия полировки (хроматография, ультрафильтрация, осаждение TCA и другие).Использование различных процедур зависит от изменчивости серотипов, а также от соответствующих свойств CPS и сырья, используемого в предшествующем процессе. Хотя в этом обзоре обобщены наиболее заметные исследования в области разработки процессов очистки капсул для S. pneumoniae , необходимы дополнительные исследования в области производства пневмококков для использования в вакцинах.

Авторские взносы

VM и NS участвовали в разработке концепции, поиске информации и помогали в составлении рукописи.В.Д. помогал в составлении и исправлении рукописи.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Работа была поддержана компанией PEDECIBA-Química, Уругвай.

Список литературы

Альбани, С. М. Ф., Да Силва, М. Р., Фрателли, Ф., Джуниор, К. П. С., Юртов, Д., Cintra, F. D. O. и др. (2015). Очистка полисахаридов из Haemophilus influenzae типа b с помощью тангенциальной микрофильтрации. Carbohydr. Polym. 116, 67–73. DOI: 10.1016 / j.carbpol.2014.03.046

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Албани, С. М. Ф., Да Силва, М. Р., Такаги, М., и Кабрера-Креспо, Дж. (2012). Улучшение процесса очистки капсульного полисахарида из Haemophilus influenzae типа b с помощью тангенциальной ультрафильтрации и диафильтрации. заявл. Biochem. Biotechnol. 167, 2068–2075. DOI: 10.1007 / s12010-012-9750-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Алонсо, Д. Э., Верхой, А. Ф., Верхоф, Дж., И Снайппе, Х. (1995). Streptococcus pneumoniae : факторы вирулентности, патогенез и вакцины. Microbiol. Ред. 59, 591–603.

Google Scholar

Auzat, I., Chapuy-Regaud, S., Le Bras, G., Dos Santos, D., Ogunniyi, A.D., Le Thomas, I., и другие. (1999). НАДН-оксидаза Streptococcus pneumoniae : его участие в компетентности и вирулентности. Мол. Microbiol. 34, 1018–1028. DOI: 10.1046 / j.1365-2958.1999.01663.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Balsells, E., Guillot, L., Nair, H., and Kyaw, M.H. (2017). Распределение серотипов Streptococcus pneumoniae , вызывающих инвазивные заболевания у детей в эпоху пост-ПКВ: систематический обзор и метаанализ. PLoS ONE 12: e0177113. DOI: 10.1371 / journal.pone.0177113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бентли, С. Д., Ааненсен, Д. М., Мавроиди, А., Сондерс, Д., Раббинович, Э., Коллинз, М., и др. (2006). Генетический анализ капсульного биосинтетического локуса от всех 90 серотипов пневмококков. PLoS Genet. 2: e31. DOI: 10.1371 / journal.pgen.0020031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бидосси, А., Mulas, L., Decorosi, F., Colomba, L., Ricci, S., Pozzi, G., et al. (2012). Функциональный подход геномики для установления комплемента переносчиков углеводов в Streptococcus pneumoniae . PLoS ONE 7: e33320. DOI: 10.1371 / journal.pone.0033320

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Blasi, F., Mantero, M., Santus, P., and Tarsia, P. (2012). Понимание бремени пневмококковой инфекции у взрослых. Clin. Microbiol.Заразить. 18, 7–14. DOI: 10.1111 / j.1469-0691.2012.03937.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Карти, Р. Т., Форси, В. Т., Шутцбах, Дж. С. и Йотер, Дж. (2000). Механизм синтеза капсульного полисахарида 3-го типа у Streptococcus pneumoniae . J. Biol. Chem. 275, 3907–3914. DOI: 10.1074 / jbc.275.6.3907

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэниэлс, К. К., Роджерс, П.Д., и Шелтон, К. М. (2016). Обзор пневмококковых вакцин: текущие рекомендации по полисахаридным вакцинам и будущие белковые антигены. J. Pediatr. Pharmacol. Ther. 2721, 27–35. DOI: 10.5863 / 1551-6776-21.1.27

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Geno, K. A., Gilbert, G. L., Song, J. Y., Skovsted, I. C., Klugman, K. P., Jones, C., et al. (2015). Пневмококковые капсулы и их типы: прошлое, настоящее и будущее. Clin. Microbiol.Ред. 28, 871–899. DOI: 10.1128 / CMR.00024-15

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гонсалвеш В., Такаги М. и Кармо Т. (2007). «Простой и эффективный метод очистки бактериальных полисахаридов для производства вакцин с использованием гидролитических ферментов и ультрафильтрации с тангенциальным потоком», в Связь текущих исследований и образовательных тем и тенденций в прикладной микробиологии , 450–457. Доступно в Интернете по адресу: http://www.formatex.org/microbio/pdf/Pages450-457.pdf

Google Scholar

Гонсалвес, В. М., Зангиролами, Т. К., Джордано, Р. Л. К., Роу, И., Танизаки, М. М., и Джордано, Р. К. (2002). Оптимизация среды и условий культивирования для продукции капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 23F. заявл. Microbiol. Biotechnol. 59, 713–717. DOI: 10.1007 / s00253-002-1075-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гонсалвес, В. М. М., Такаги, М., Лима, Р. Б., Массальди, Х., Джордано, Р. К., и Танизаки, М. М. (2003). Очистка капсульного полисахарида из Streptococcus pneumoniae серотипа 23F с помощью процедуры, подходящей для увеличения масштаба. Biotechnol. Appl. Biochem. 37, 283–287. DOI: 10.1042 / BA20020075

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гуидолин, А., Морона, Дж. К., Морона, Р., Хансман, Д., и Патон, Дж. К. (1994). Анализ нуклеотидной последовательности генов, необходимых для биосинтеза капсульного полисахарида в Streptococcus pneumoniae типа 19F. Заражение. Иммун. 62, 5384–5396.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Хенрихсен, Дж. (1995). Шесть недавно признанных типов Streptococcus pneumoniae . J. Clin. Microbiol. 33, 2759–2762.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Янссон, П.-Э., Линдберг, Б., и Линдквист, У. (1985). Структурные исследования капсульного полисахарида из Streptococcus pneumoniae тип 5. Carbohydr. Res. 140, 101–110.DOI: 10.1016 / 0008-6215 (85) 85053-9

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jung, S.J., Seo, E.S., Yun, S.-Il., Minh, B.N., Jin, S.D, Ryu, H.J., et al. (2011). Очистка капсульного полисахарида, продуцируемого Streptococcus pneumoniae серотипа 19А. J. Microbiol. Biotechnol. 21, 734–738. DOI: 10.4014 / jmb.1010.10043

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ходакарами М. и Алагха Л.(2017). Высокоэффективные полимеры для процессов разделения и очистки: обзор. Полим. Пласт. Technol. Англ. 56, 2019–2042. DOI: 10.1080 / 03602559.2017.1298800

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, Л., Макги, Л., Томчик, С., и Билл, Б. (2016). Биологические и эпидемиологические особенности устойчивого к антибиотикам Streptococcus pneumoniae в эпоху до и после конъюгированной вакцины: перспектива Соединенных Штатов. Clin. Microbiol. Ред. 29, 525–552. DOI: 10.1128 / CMR.00058-15

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Колкман, М.А.Б., Ван дер Зейст, Б.А.М., и Нуйтен, П.Дж.М. (1997). Функциональный анализ гликозилтрансфераз, кодируемых локусом биосинтеза капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 14. J. Biol. Chem. 272, 19502–19508. DOI: 10.1074 / jbc.272.31.19502

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коскела, М.(1987). Антитела к пневмококковому полисахариду С у детей: реакция на острый пневмококковый средний отит или вакцинацию. Pediatr. Заразить. Дис. J. 6, 519–526.

Google Scholar

Ларсон, Т. Р., и Йотер, Дж. (2017). Капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae связан с пептидогликаном через прямую гликозидную связь с β-D- N -ацетилглюкозамином. Proc. Natl. Акад. Sci. США 114, 5695–5700. DOI: 10.1073 / pnas.1620431114

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Li, Z., Chen, A., Li, Z., Qu, M., Chen, H., Yang, B., et al. (2017). Новый и экологически безопасный биопроцесс для отделения и частичной очистки полисахаридов из мицелия Cordyceps sinensis с помощью водной двухфазной системы. RSC Adv. 7, 37659–37665. DOI: 10.1039 / C7RA05360F

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Липсич, М., Уитни, К.Г., Зелл, Э., Кайджалайнен, Т., Даган, Р., и Малли, Р. (2005). Являются ли антикапсулярные антитела основным механизмом защиты от инвазивного пневмококкового заболевания? PLoS Med. 2: e15. DOI: 10.1371 / journal.pmed.0020015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Macha, C., Lavanya, A., and Nanna, R. (2014). Очистка капсульных полисахаридов Streptococcus pneumoniae с использованием фосфата алюминия и этанола. Внутр. J. Pharm. Pharm. Sci. 6, 385–387.

Google Scholar

Маркизио П., Эспозито С., Скито Г. К., Марчезе А., Каванья Р. и Принципи Н. (2002). Носоглоточное носительство Streptococcus pneumoniae у здоровых детей: последствия использования гептавалентной пневмококковой конъюгированной вакцины. Emerg. Заразить. Дис. 8, 479–484. DOI: 10.3201 / eid0805.010235

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мартенс, П., Ворм, С. В., Лундгрен, Б., Конрадсен, Х.Б. и Бенфилд Т. (2004). Повторный обзор серотип-специфической смертности от инвазивной болезни Streptococcus pneumoniae . BMC Infect. Дис. 4:21. DOI: 10.1186 / 1471-2334-4-21

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мартос, Б. В., Ферри, А. Л. С., де Фигейредо, Д. Б., Зангиролами, Т. К., и Гонсалвес, В. М. (2015). Производство капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 1 : от отбора штаммов до культивирования с подпиткой. заявл. Microbiol. Biotechnol. 99, 10447–10456. DOI: 10.1007 / s00253-015-6928-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Merieux, S. I., Arminjon, F., and Donikian, R. (1981). Процедура очистки полиозидов Streptococcus pneumoniae и вакцины на основе очищаемых полиозидов. Патент WO1982001995A1 . Доступно в Интернете по адресу: https://patents.google.com/patent/WO1982001995A1/fr

Митчелл, Т.Дж., Эндрю, П.В., Сондерс, Ф.К., Смит А. Н. и Булнуа Г. Дж. (1991). Активация комплемента и связывание антител пневмолизином через область токсина, гомологичную белку острой фазы человека. Мол. Microbiol. 5, 1883–1888. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1991.tb00812.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мораис В. и Суарес Н. (2016). Экономическая оценка питательной среды Streptococcus pneumoniae . г. J. Biochem. Biotechnol. 12, 133–138.DOI: 10.3844 / ajbbsp.2016.133.138

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Морона, Дж. К., Морона, Р., и Патон, Дж. К. (1997). Характеристика локуса, кодирующего путь биосинтеза капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae типа 19F. Мол. Microbiol. 23, 751–763. DOI: 10.1046 / j.1365-2958.1997.2551624.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нилман, К., Гилен, С. П. М., Аэртс, П. К., Даха, М.R., Mollnes, T.E., Roord, J.J., et al. (1999). Устойчивость как к активации комплемента, так и к фагоцитозу у пневмококков 3 типа опосредуется связыванием фактора белка, регулирующего комплемент, H. Infect. Иммун. 67, 4517–4524.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Пато, Т. П., Барбоза, А. Д. П. Р. и да Силва Джуниор, Дж. Г. (2006). Очистка капсульного полисахарида из Neisseria meningitidis серогруппы C методом жидкостной хроматографии. Дж.Chromatogr. Б. Аналит. Technol. Биомед. Life Sci. 832, 262–267. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2006.01.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шарма С., Ханиф С., Кумар Н., Джоши Н., Рана Р., Далал Дж. И др. (2015). Быстрые способы очистки капсульных полисахаридов из Neisseria meningitidis серогрупп A и C. Biologicals 43, 383–389. DOI: 10.1016 / j.biologicals.2015.06.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Суарес, Н., Фрагуас, Л. Ф., Тексейра, Э., Массальди, Х., Батиста-Виера, Ф., и Феррейра, Ф. (2001). Получение капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae типа 14 и его очистка методом аффинной хроматографии. заявл. Environ. Microbiol. 67, 969–971. DOI: 10.1128 / AEM.67.2.969-971.2001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Танизаки, М. М., Гарсия, Л. Р., Рамос, Дж. Б., Лейте, Л. К. С., Хисс, Х., Фурута, Дж. А. и др. (1996). Очистка полисахарида менингококковой группы C с помощью процедуры, подходящей для увеличения масштаба. J. Microbiol. Методы 27, 19–23. DOI: 10.1016 / 0167-7012 (96) 00921-9

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уотсон, Д. А., Мушер, Д. М. (1990). Прерывание производства капсулы у Streptococcus pneumoniae серотипа 3 путем введения транспозона Tn916. Заражение. Иммун. 58, 3135–3138.

Google Scholar

Ваттал, К., Оберой, Дж. К., Прути, П. К., и Гупта, С. (2007). Носоглоточное носительство Streptococcus pneumoniae . Indian J. Pediatr. 74, 905–907. DOI: 10.1007 / s12098-007-0166-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wu, K., Xu, H., Zheng, Y., Wang, L., Zhang, X., Yin, Y., et al. (2016). CpsR, регулятор семейства GntR, транскрипционно регулирует биосинтез капсульного полисахарида и контролирует бактериальную вирулентность в Streptococcus pneumoniae . Sci. Реп. 6: 29255. DOI: 10.1038 / srep29255

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Йотер, Дж.(2011). Капсулы Streptococcus pneumoniae и других бактерий: парадигмы биосинтеза и регуляции полисахаридов. Annu. Rev. Microbiol. 65, 563–581. DOI: 10.1146 / annurev.micro.62.081307.162944

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Зафар, М.А., Хамагучи, С., Зангари, Т., Каммер, М., и Вайзер, Дж. Н. (2017). Тип и количество капсул влияют на выделение и передачу Streptococcus pneumoniae . MBio 8: e00989 – e00917.DOI: 10.1128 / mBio.00989-17

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Занардо, Р. Т., Ферри, А. Л. С., Фигейредо, Д. Б., Крашовец, С., Кабрера-Креспо, Дж., Гонсалвес, В. М. и др. (2016). Разработка нового процесса очистки капсульного полисахарида от Streptococcus pneumoniae Серотип 14. Braz. J. Chem. Англ. 33, 435–443. DOI: 10.1590 / 0104-6632.20160333s20150140

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжан, Дж., и Робинсон, Д. (2005). Разработка не содержащих животных, белков и химически определенных сред для культуры клеток NS0. Цитотехнология 48, 59–74. DOI: 10.1007 / s10616-005-3563-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пропорции

Пропорция означает, что два соотношения (или дроби) равны.

Пример:

Таким образом, 1 из 3 равно 2 из 6

Соотношения такие же, поэтому они пропорциональны.

Пример: веревка

Длина каната и вес пропорциональны.

Если 20 м, каната весит 1 кг , тогда:

• 40 м троса весит 2 кг
• 200 м троса весит 10 кг
• и др.

Итак:

20 1 знак равно 40 2

Размеры

Когда формы «пропорциональны», их относительные размеры одинаковы.

Пример: международные форматы бумаги (например, A3, A4, A5 и т. Д.) Имеют одинаковые пропорции:

Таким образом, любой рисунок или документ можно изменить, чтобы он поместился на любом листе.Очень аккуратный.

Работа с пропорциями

ТЕПЕРЬ, как нам это использовать?

Пример: вы хотите нарисовать голову собаки … какой длины она должна быть?

Запишем пропорцию с помощью соотношения 10/20 сверху:

? 42 знак равно 10 20

Сейчас решаем специальным методом:

Умножьте на известные углы,
затем разделите на третье число

И получаем это:

? = (42 × 10) / 20
= 420/20
= 21

Итак, вы должны нарисовать голову 21 длиной .

Использование пропорций для вычисления процентов

Процент — это на самом деле соотношение! Сказать «25%» на самом деле означает «25 на 100»:

25% = 25 100

Мы можем использовать пропорции для решения вопросов, связанных с процентами.

Уловка состоит в том, чтобы поместить то, что мы знаем, в эту форму:

Часть Целая = Процент 100

Пример: сколько 25% от 160?

Процент 25, целое 160, и мы хотим найти «часть»:

Деталь 160 = 25 100

Умножьте на известные углы, затем разделите на третье число:

Деталь = (160 × 25) / 100
= 4000/100
= 40

Ответ: 25% от 160 это 40.

Примечание: мы также могли бы решить эту проблему, выполнив сначала разделение, например:

Часть = 160 × (25/100)
= 160 × 0,25
= 40

Любой метод работает нормально.

Мы также можем найти процент:

Пример: сколько будет 12 долларов в процентах от 80 долларов?

Укажите, что нам известно:

$ 12 $ 80 = процентов 100

Умножьте на известные углы, затем разделите на третье число.На этот раз известные углы — верхний левый и нижний правый:

Процент = (12 долларов × 100) / 80 долларов США
= 1200/80
= 15%

Ответ: 12 долларов — это 15% из 80 долларов

Или найдите целое:

Пример: продажная цена телефона составляла 150 долларов, что составляло только 80% от нормальной цены. Какая была нормальная цена?

Укажите, что нам известно:

$ 150 Всего = 80 100

Умножьте на известные углы, затем разделите на третье число:

Всего = (150 $ × 100) / 80
= 15000/80
= 187.50

Ответ: у телефона нормальная цена была 187,50 $

Использование пропорций для решения треугольников

Мы можем использовать пропорции для решения подобных треугольников.

Пример: какой высоты дерево?

Сэм попытался использовать лестницу, рулетку, веревки и другие вещи, но так и не смог определить, насколько высоким было дерево.

Но тут Сэму пришла в голову умная идея … похожие треугольники!

Сэм измеряет палку и ее тень (в метрах), а также тень от дерева, и вот что он получает:

Теперь Сэм делает набросок треугольников и записывает соотношение «Высота к длине» для обоих треугольников:

Высота: Длина тени: h 2.9 мес. = 2,4 м 1,3 м

Умножьте на известные углы, затем разделите на третье число:

h = (2,9 × 2,4) / 1,3
= 6,96 / 1,3
= 5,4 м (с точностью до 0,1)

Ответ: дерево 5,4 м высотой.

И ему даже лестница не понадобилась!

«Высота» могла быть внизу, если она была внизу для ОБОИХ соотношений, например:

Попробуем соотношение «Длина тени к высоте»:

Длина тени: Высота: 2.9 м ч = 1,3 м 2,4 м

Умножьте на известные углы, затем разделите на третье число:

h = (2,9 × 2,4) / 1,3
= 6,96 / 1,3
= 5,4 м (с точностью до 0,1)

Это тот же расчет, что и раньше.

A «Бетон», пример

Коэффициенты могут иметь более двух чисел !

Например, бетон получают путем смешивания цемента, песка, камней и воды.

Типичная смесь цемента, песка и камней записывается как соотношение, например 1: 2: 6.

Мы можем умножить все значения на одну и ту же сумму и получить то же соотношение.

10:20:60 совпадает с 1: 2: 6

Итак, когда мы используем 10 ведер цемента, мы должны использовать 20 ведер песка и 60 камней.

Пример: вы только что загрузили в миксер 12 ведер камней, сколько цемента и сколько песка нужно добавить, чтобы получилась смесь 1: 2: 6?

Разложим в таблице для наглядности:

У вас есть 12 ведер с камнями, но в соотношении 6.

Это нормально, у вас просто вдвое больше камней, чем число в соотношении … так что вам нужно вдвое больше всего , чтобы сохранить соотношение.

Вот решение:

И соотношение 2: 4: 12 такое же, как 1: 2: 6 (потому что они показывают те же относительные размеры )

Итак, ответ: добавьте 2 ведра цемента и 4 ведра песка. (Вам также понадобится вода и много помешивания ….)

Почему у них одинаковое соотношение? Ну, соотношение 1: 2: 6 говорит, что :

• вдвое больше песка, чем цемента (1: 2: 6)
• В 6 раз больше камней, чем цемента (1: 2: 6)

В нашем миксе:

• вдвое больше песка, чем цемента (2: 4: 12)
• В 6 раз больше камней, чем цемента (2: 4: 12)

Так должно быть в самый раз!

Это хорошая черта отношений.Вы можете увеличивать или уменьшать количество, и если относительные размеры одинаковы, то соотношение будет таким же.